Kerja eksperimen pada pemindahan keratinosit alogenik ke parut tikus putih yang dicipta secara buatan

Keinginan untuk menggunakan potensi selular dan keperluan untuk mencari kaedah baru yang berkesan untuk meningkatkan penampilan estetik dari parut membawa kepada idea untuk cuba mengkaji kemungkinan transplantasi keratinocyte ke permukaan parut.

Dalam usaha untuk membuktikan kemungkinan menggunakan budaya keratinocyte untuk meningkatkan penampilan parut kerja eksperimen yang telah dilakukan ke atas tikus makmal putih yang ditubuhkan permukaan parut. Parut tikus model telah disediakan oleh buatan penyembuhan luka yang dikenakan di belakang, bersama-sama tulang belakang. Tikus dipotong keping kulit yang sama, saiz 2x3 cm. Selepas 2.5 bulan selepas pembedahan "simulasi parut" tikus telah dijalankan pembedahan dermabrasion (pembuangan lapisan atas melalui ignioperation rumen) dan dipindahkan keratinosit allogenic, diasingkan daripada kulit tikus muda 2-4 hari selepas kelahiran.

Pengasingan dan pertumbuhan epidermosit tikus telah dijalankan di makmal teknologi selular Institut Cytology RAS teknologi berikut.

Kulit dicuci di larutan Hanks saline yang mengandungi 200 U / ml gentamicin, dipotong menjadi kepingan kecil dengan luas 0.2-0.5 cm ². Kutikula kulit diinkubasi dalam penyelesaian 0.5% disaspas dalam larutan salutan fosfat salin yang seimbang pada 37 ° C selama satu jam. Potongan itu kemudiannya dipindahkan ke saline buffered fosfat Dulbecco dan epidermis dipisahkan dari dermis. Epidermis dieram dalam 0.125% penyelesaian trypsin selama 10-15 minit di bawah kacau pada kelajuan 50 put / min, dan selepas itu enzim dihentikan dengan penambahan 5% janin bovine serum. Satu pertiga daripada penggantungan sel yang terhasil telah digunakan dalam bentuk tulen untuk salah satu daripada pilihan untuk pemindahan parut, ketiga kedua ditanam di negeri lapisan filem biocompatible "Polipor", ketiga - di atas piring petri tanpa substrat. Operasi dermabrasion parut yang diperolehi dalam tikus dengan transplantasi epidermosit tikus di atasnya telah dijalankan di bawah anestesia eter dengan memanaskan haba.

Kumpulan pertama tikus selepas dermabrasion pada digilap, dibasuh dengan masin dan permukaan kering rumen steril melapisi keping rumput yang dimasukkan hancur tikus allogeneic epidermotsitov buburan pada kepekatan 1.5 juta sel setiap 1 ml (mengikut Institut Cytology). Kepingan Batistovye sesuai dengan parut yang dipoles supaya sel-sel terletak pada permukaan parut. Pembalut beberapa lapisan kain kasa telah dijahit di atas, yang dijahit ke pinggang parut.

Sebahagian daripada penggantungan sel yang dihasilkan telah dilapisi dalam hidangan Petri pada filem Polypore steril yang dipotong bentuk cawan, bahagian lain pada hidangan Petri tanpa filem. Penanaman dilakukan dalam medium FAD yang terdiri daripada campuran DMEM dan F12 dalam nisbah 3: 1. Dengan penambahan 10% serum bovine janin, 5 μg / ml insulin (Sigma), 0.5 μg / ml hidrocortisone hemisuccinate (Sigma). 10 μg / ml faktor pertumbuhan epidermis EGF (Institut Cytology RAS, St Petersburg). Kumpulan tikus kedua dan ketiga dengan 7 orang telah dikendalikan 6 hari selepas yang pertama. Pada masa ini, strata multilayer terbentuk daripada penggantungan keratinosit yang ditabur dalam piring petri, yang dipindahkan ke tikus. Kumpulan kedua ditransplantasikan dengan epidermosit pada filem, kumpulan ketiga - dengan lapisan berbilang lapisan tanpa substrat. Selepas 7 hari, lapisan-lapisan keratinocytes alogic (MPALK), yang disemai pada filem Polypore, ditransplantasikan secara langsung ke permukaan luka. Di atas, filem itu, untuk mengelakkan rippingnya, telah diperbaiki dengan gaun berpakaian multilayer dan dijahit ke kulit tikus.

Sebelum diubah keratinosit Kumpulan ketiga tikus, ditanam tanpa substrat, menghasilkan pemisahan PAC dari bahagian bawah Petri rawatan hidangan dispase, mempunyai keupayaan untuk terpilih memecahkan komunikasi dermo-epidermis. Di bawah tindakan takungan dispase multilayered memusnahkan sambungan lapisan sel basal ke bahagian bawah piring Petri dan untuk tahap yang lebih rendah, ia memberi kesan kepada komunikasi intercellular, yang menjadikan ia mungkin untuk "mengeluarkan" seluruh lapisan. Detasmen stratum sel multilayered oleh pelupusan telah dilakukan seperti berikut. Dari hidangan Petri dicampur medium pengangkutan, lembaran sel telah dibasuh tiga kali dengan medium yang mengandungi antibiotik, khususnya - gentamicin (0.2 mg / ml). Lapisan multilayer telah dicurahkan 0125 penyelesaian% dispase ( «Sigma») dan diletakkan di dalam inkubator di mana mereka telah dieram pada t = 37 ° C selama 20-30 minit. Kemunculan Corolla putih, mengelupas sekitar pinggir takungan - penunjuk awal proses memisahkan ia dari tepi dan bahagian bawah piring Petri. Beberapa minit selepas permulaan proses pemisahan, penyelesaian dispase telah dikosongkan 2-3 kali lapisan epitelium telah dibasuh dengan sederhana. Pada permukaan lapisan epidermis yang telah digunakan, potong kepada saiz cawan sekeping luka steril memakai pakaian yang "Leith-warna, yang melekang dipisahkan pembentukan dispase, delamination lagi bahagian bawah cawan dengan spatula. Menggunakan pinset oftalmik lapisan bersama-sama dengan lapisan lampin" Leith-warna "(Russian ) berpecah dari bahagian bawah piring petri dan berhati-hati dipindahkan ke permukaan bersedia parut. Napkin "Lita warna" mengandungi dalam komposisinya dan eksolin gentamicin (ekstrak kolagen), yang apabila basah persekitaran masih bercambah pada masa akan datang Sem penyelesaian masin bengkak dan menjadi salutan luka moden yang menyediakan perlindungan yang baik dari jangkitan luar dan penyembuhan pesat kerana kebasahan yg baru jadi dengan struktur.

Filem poliprop dan serbet Lita berwarna berlapis dengan pembalut kain kasa yang dijahit ke kulit tikus untuk penekanan lebih tahan lama. Setiap tikus ditanam di dalam sangkar yang berasingan, untuk mewujudkan keadaan yang optimum bagi penyelenggaraan dan penggalian keratinosit yang dipindahkan. Pembalut tikus yang dipindahkan penggantungan dan multilayered takungan epidermotsitov pukulan dispase, setiap hari beberapa kali sehari, dibasahkan dengan masin steril untuk mewujudkan keadaan yang paling sesuai untuk sel-sel engraftment. Memandangkan filem "Polypor" tidak dapat ditembusi oleh air, tikus dari kumpulan kedua tidak membasahi pembalut, yang merupakan salah satu kelebihan terhadap pemindahan tanpa filem. Selepas 10 hari, pembalut dikeluarkan. Gambar klinikal parut selepas pemindahan sel berbeza sedikit daripada parut tanpa pemindahan, kecuali pewarna yang lebih merah jambu (disebabkan oleh dermabrasion) dan mengelupas yang lebih besar. Fakta ini menunjukkan bahawa. Bahawa sejurus selepas kehilangan penutup luka dengan IPC, tiada perubahan berlaku dalam rumen.

Mengambil bahan biopsi dalam tikus.

Selepas 1, 2, 5 dan 9 bulan selepas pemindahan keratinocytes alagic tikus ke tanah parut tikus putih, bahan itu diambil untuk pemeriksaan mikroskopik histologi, sitomorphologi dan elektron. Sebagai contoh kawalan kulit tikus biasa dan parut diambil tanpa pemindahan sel. Anestesia dalam tikus dilakukan dengan anestesia eter.

Selepas anestesia, dari kawasan yang ditandai, ke mana keratinosit ditransplantasikan, penagih biopsi dengan diameter 2 mm. Potongan tisu parut diambil dan diletakkan dalam penyelesaian glutaraldehyde 2.5% untuk menyediakan bahan untuk mikroskop elektron. Keping tisu diambil untuk pemeriksaan histologi telah diletakkan di dalam 10% larutan formalin neutral, diikuti oleh melalui alkohol pendawaian dan diisi parafin, diikuti dengan memotong seksyen ultrathin dan melihat mereka dalam mikroskop cahaya optik.

Kawalan I. Kulit tikus biasa.

Untuk melihat perbezaan antara gambar mikroskopik kulit tikus dan kulit bekas luka biasa pada waktu tertentu selepas pemindahan IPC, gambar dan penerangan kepada mereka di semua peringkat kajian ini ditunjukkan.

Epidermis kulit normal terdiri daripada 7-9 lapisan sel. Lapisan ketat yang sederhana. Di tempat ia terdiri daripada 6-8 lapisan skala horny. Lapisan basal diwakili oleh sel-sel bentuk silinder dengan cahaya besar, nukleus biasa dan beberapa nukleoli. Hubungan antara sel-sel dan membran basal jelas dinyatakan. Di bawah membran basal yang jelas, yang mempunyai pertumbuhan kecil dalam lapisan subepidermal, selari dengannya terletak bundelan halus kolagen dan serat elastin, antaranya adalah bentuk fibroblast yang memanjang, kapal kecil. Dalam lapisan yang lebih dalam, berkas kolagen dan serat elastin terletak pada arah yang berbeza. Antaranya terdapat banyak kapal dengan dinding tipis berkaliber yang sama, unsur selular (fibroblas, sel mast, leukosit). Dalam sebilangan besar folikel rambut, kelenjar sebum.

Kawalan 2. Sangkar tikus berusia 2 bulan.

Gambar klinikal. Paras merah jambu, dengan mengupas, di tempat-tempat kerak kekal. Kawasan mereka berkurangan disebabkan penguncupan serat kolagen dan menjadi kira-kira 3,0-3,5 cm ^:. Lampiran kulit tidak hadir.

Gambar mikroskopik. Epidermis terdiri daripada 3-5 lapisan sel, dilipat, diwakili oleh sel basal bentuk bulat, satu baris subulate, 1-2 baris berbutir dengan biji keratogialin di lapisan atas, terdapat bahagian edema intraselular. Lapisan kornea berubah secara heterogen dari sangat tipis hingga menebal. Terdapat lipatan rumen yang disebabkan oleh (penguncupan) tisu parut. Lipatan menembusi lapisan papillary dan memberi kesan papillae. Batasan antara epidermis dan dermis adalah garis lurus. Membran basal tidak dapat dikesan di mana-mana. Di bahagian bawah lapisan subepidermal dan lebih dalam - kapal dengan dinding yang tebal, longgar, banyak ditinggalkan, dengan fenomena stasis. Sekitar kapal - kumpulan makrofag, fibroblas. Makrofag mengelilingi erythrocyte yang muncul dari kapilari dan fagositiknya. Dalam lapisan yang lebih dangkal - kapilari kecil. Di bawah epidermis, serat kolagen longgar. Dalam lapisan rumen yang lebih dalam - berkas serat kolagen di mana terdapat banyak fibroblas.

Tudung tikus sebulan selepas pemindahan tikus keratinosit tikus MPAl.

Gambar klinikal. Paras merah jambu, kawasan mereka berkurangan, terutamanya dalam diameter dan purata 2.5-3 cm ². Kelenjar rambut dan sebatian tidak hadir.

Ini pemeriksaan mikroskopik bahan yang diambil dari tikus dengan pemindahan MPAlK MPAlK pada filem dan substrat tanpa ketara sama. Walau bagaimanapun, dari segi teknikal, bekerja dengan MPAlK tidak disokong lebih sukar dan susah payah daripada apabila ditanam MPAlK pada substrat, jadi kajian selanjutnya isu pemindahan kertainotsitov parut yang kami gunakan sebagai asas untuk penanaman ( "substrat") rumput berlapis.

Gambar mikroskopik. Terdapat penebalan epidermis pada lapisan 15-20, hampir ke tengah-tengah yang keratinosit mempunyai bentuk sempit, memanjang, menegak dan susunan yang padat. Sel basal disusun dalam garis yang tidak rata. Nukleus mereka adalah cahaya, besar, bulat dalam bentuk dengan satu atau dua nukleoli, yang menunjukkan aktiviti sintetik dan proliferatif tinggi mereka. Batasan antara epidermis dan dermis adalah garis lurus. Lapisan berduri berkembang dengan baik, terdiri daripada 3-5 lapisan sel bentuk bulat, terdapat 2 sel nukleolus.

Segera di bawah membran basal - padat dengan nipis serat kolagen, selari dengannya sejumlah besar vakum kosong, serat kolagen yang lebih mendalam adalah lebih kasar, yang dikumpulkan dalam berkas padat. Banyak fibroblast yang besar, sel mast (2-3 dalam bidang penglihatan), makrofaj, leukosit dan vakum kosong, dinding yang longgar, di sekelilingnya terletak serabut kolagen longgar. Dalam beberapa kapal - stasis, diapedesis unsur seragam. Sekitar kapal - fibroblas, limfosit tunggal. Lampiran kulit tidak hadir.

Apabila penggantungan keratinocyte ditransplantasikan kepada parut yang digilap, gambar mikroskopik berbeza dari sebelumnya. Dalam kebanyakan haiwan - epidermis adalah nipis, terdiri daripada 5-6 lapisan sel. Lapisan bawah terdiri daripada sel-sel yang tidak teratur, bentuk poligon dengan nukleus berbentuk tidak teratur. Keadaan lapisan subepidermal adalah serupa dengan kumpulan hewan tanpa transplantasi.

Dalam kes ini, seseorang boleh bercakap sama ada kelewatan proses yang mengiringi pemindahan sel, atau kehilangan sel yang besar yang ditransplantasikan dalam bentuk penggantungan. Oleh itu, kesimpulan dibuat bahawa pembetulan parut oleh pemindahan keratinocyte dalam bentuk penggantungan adalah tidak sesuai.

Tudung tikus 2 bulan selepas pemindahan tikus keratinosit tikus MPAl.

Gambar klinikal. Parut kelihatan nipis, lembut. Di tempat terdapat ekdisis, skala.

Gambar mikroskopik. Stratum corneum menebal, di tempat - hyperkeratosis. Epidermis bertumpu, ia terdiri daripada 12-20 baris sel. Batasan antara epidermis dan dermis adalah garis lurus. Gentian kolagen halus di bawah epidermis terletak agak ketat. Dalam lapisan rumen yang lebih dalam, mereka dikumpulkan dalam berkas besar kasar. Dalam lapisan subepidermal, pembentukan kapal baru muncul. Dalam lapisan bawah tisu parut - banyak bekas kosong, terletak selari dengan permukaan epidermis. Fibroblas besar diagihkan secara sama rata dalam ketebalan rumen, terdapat banyak makrofag yang raksasa, pelbagai, dan banyak.

Tudung tikus 5 bulan selepas pemindahan sperma tikus MP.

Gambar klinikal. Scar kelihatan licin, licin, tanpa pengelupasan, terdapat rambutpun dari kepadatan mereka lebih besar di pinggir parut, yang menunjukkan kelebihan folikel rambut tumbuh ke dalam rumen dan neoplasma daripada folikel rambut. Kawasan parut terus berkurang.

Gambar mikroskopik. Epidermis itu masih tebal (15-20 lapisan, kadang-kadang sehingga 30) di lapisan atas dipenuhi dengan biji keratogialin. Membran basal kelihatan jelas. Di bawah serat kolagennya terbiar longgar. Dalam lapisan bawah - kolagen lebih kuat dan kemas. Di antara rasuk kolagen terdapat banyak kapilari. Di lapisan atas bilangan kapal kosong berkurang. Epidermis dan dermis sedikit ikal. Terdapat kesan sampingan epidermis dalam tisu parut. Di antara serat kolagen terdapat kapal baru yang terbentuk. Muncul folikel rambut tunggal dan kelenjar sebum.

Tudung tikus 9 bulan selepas pemindahan tikus epidermosit tikus IPA.

Gambar klinikal. Paras menjadi lebih kecil berbanding dengan istilah sebelumnya, kawasannya rata-rata sekitar 1.5-2.0 cm ². Parut tidak sekata ditutup dengan rambut nipis, terutamanya di sekitar pinggir. Pengukuran kecil plat kecil dikekalkan.

Gambar mikroskopik.

Epidermis menjadi lebih nipis, diwakili dari 6-8 baris sel, mengingatkan struktur epidermis kulit biasa tikus, hanya kepadatan sel oleh 1 mm. Lebih tinggi dan mereka lebih kecil. Lapisan asas terdiri daripada sel-sel kecil berbentuk silinder bulat. Membran basal adalah jelas, hemidesmosomes kelihatan jelas. Kehadiran pertumbuhan epiderma dalam lapisan subepidermal adalah diperhatikan. Lapisan papillary dinyatakan sepanjang keseluruhan parut. Fakta-fakta ini menunjukkan bahawa untuk tempoh masa ini, melekat pada keratinosit yang dipindahkan telah menjadi lebih kuat dengan tisu asas rumen. Akibatnya, menjaga parut orang dengan transplantasi MALC 9 bulan selepas transplantasi IPC boleh menjadi tradisional. Di bawah epidermis adalah gentian kolagen yang lebih halus daripada lapisan dalam. Terdapat banyak kapal, terutamanya di lokasi yang superficially. Di dalam kapal-kapal yang lebih besar, dinding-dinding itu menebal. Folikel rambut dan kelenjar sebum dalam jumlah besar. Corak mikroskopik menyerupai tisu kulit.

Hasil kerja percubaan dan perbincangan mereka.

Semasa kerja-kerja ini di parut tiruan kulit tikus selepas dermabrasion operasi, keratinosit dipindahkan dalam pelbagai formah- pada permukaan luka, sebagai penggantungan dalam kain hipoksia dan pembentukan berlapis tanpa substrat. Kerja-kerja ini dilakukan untuk mendapatkan data morfologi mengenai kesan keratinocytes allogenic yang dipindahkan pada parut, serta menentukan varian pemindahan optimum.

Telah didapati bahawa ketiga-tiga cara pemindahan adalah nyata, tetapi pemindahan ILA tanpa substrat adalah prosedur yang sangat susah payah, di mana IPAC boleh cedera, yang menjejaskan hasil pemindahan. Selain itu, kaedah pemindahan ini tidak termasuk kerja di permukaan besar.

Pemindahan keratinocyte penggantungan - semakin kaedah lebih ekonomi tidak memerlukan sel-sel lama pengkulturan dan mudah dalam penjelmaan ini, kenalan menggunakan preforms kain hipoksia steril, dimensi yang sesuai dengan nilai parut. Ketinggalan kesan terapeutik semasa pemindahan penggantungan sel selama kira-kira satu bulan berbanding dengan MIC pada lapisan luka bukanlah masa yang penting dengan tempoh rawatan, yang dikira dalam beberapa bulan. Adalah diketahui bahawa semasa pemindahan IPC untuk membakar pesakit, transformasi keadaan struktur kulit berlaku secara beransur-ansur dan selama beberapa tahun. Pemindahan budaya keratinocyte pada penutup luka adalah kaedah yang paling mudah dan menjanjikan, namun ia juga lebih mahal. Sebagai tambahan, memerlukan hari ini untuk mencari salutan yang lebih canggih yang mestilah plastik, hygroscopic, mempunyai sifat bacteriostatic atau bactericidal dan biologi neutral untuk sel. Filem "Polipor" - versi pertengahan liputan luka filem dalam negeri, walaupun beberapa kelemahan, telah membolehkan kami untuk mengkaji tikus pemindahan uji kaji keratinocyte pada parut dan untuk membuat kesimpulan tentang keberkesanan ini arah tarikan parut.

Penulis yang melakukan pemindahan IPC pada luka bakar mencatatkan bahawa pada minggu pertama selepas pemindahan lapisan keratinocyte multilayered pada luka yang dibersihkan, epidermis menebal dan berstrata. Semua lapisan epidermis didefinisikan dengan teliti. Adalah menarik bahawa bilangan lapisan sel dalam pemindahan adalah 10-30% lebih besar daripada spesimen biopsi kulit. Para penulis mencatat rupa granul keratogialin pada hari ke-5 selepas pemindahan MPA, membran basal dan hemidesmosom - sudah pada hari ketiga.

J.Rives et al. (L994), Paramonov BA (1996); NM Kuznetsov et al. (1998) mendapati bahawa semasa tempoh awal berikutan pemindahan pesakit BMD dengan kecacatan kulit polnosloynymi selepas terbakar, komunikasi antara dermis dan epidermis adalah sangat lemah dan garis lurus, lapisan papillary tidak hadir. Pada akhir bulan ke-2 bermula pembentukan papila cetek dan appendages kulit, dermis dan epidermis komunikasi menjadi lebih kuat. Data sastera govoryato pemindahan keratinosit allogeneic untuk luka terbakar pesakit sebagai kaedah yang cerah. Walaupun fakta bahawa penolakan keratinosit allogeneic berlaku dikemukakan oleh pelbagai penulis dalam tempoh dari 10 hari hingga 3 bulan, bagaimanapun, mereka mempunyai peranan dalam penyembuhan permukaan luka, melepaskan faktor pertumbuhan dan mekanikal menutup kecacatan itu. Adalah dipercayai bahawa MPAlK telah mengurangkan aktiviti antigen, seperti ketika berbudaya dalam vitro kehilangan sel-sel Langerhans yang membolehkan mereka untuk wujud untuk masa yang lama dalam tubuh penerima. Di samping itu, budaya allogeneic berasal dari kulit orang muda yang sihat mempunyai potensi biologi lebih besar daripada budaya autologous pesakit selepas trauma.

Matlamat utama kajian kami adalah untuk mengetahui sama ada keratinosit allogenic akan bertahan pada bekas luka dan apa yang akan menjadi perubahan dalam tisu parut di bawah pengaruh "salutan luka" secara biologi. Sekiranya hasil positif, lakukan teknologi intensif tenaga kerja yang paling berkesan dan paling kurang dalam bidang pemulihan ini.

Data yang diperoleh oleh kami dalam banyak aspek ternyata sama dengan data sastera mengenai perubahan morfologi yang berlaku di epidermis manusia selepas pemindahan keratinosit semuaogenik untuk membakar luka. Tetapi terdapat perbezaan yang signifikan, baik dari segi substrat morfologi, yang dipindahkan, dan dari segi teknologi. So. Proses pembentukan membran basal dan sambungan dermo-epidermal (hemidesmosomes, papillae) berlaku pada masa akan datang daripada pemindahan pemindahan keratinocyte ke permukaan luka tanpa perubahan parut. Ini nampaknya disebabkan oleh pemakanan miskin tisu rumen berbanding dengan dermis atau fascia otot. Parut, terutamanya yang lama, adalah tisu penghubung yang padat dengan jumlah yang sangat kecil dari kapal, bahagian bawah luka bakar adalah tisu granulasi yang kaya dengan pembuluh darah. Oleh itu, adalah jelas bahawa syarat-syarat di mana transplantasi dan penggambaran keratinocytes berlaku sama sekali berbeza. Semakin vascularized kawasan pemindahan sel, lebih mudah untuk memprosesnya. Dari postulat ini ada kesimpulan tentang keinginan untuk bekerja dengan bekas luka muda, di mana tisu penghubung masih cukup longgar dan kaya dengan pembuluh darah.

Hasil daripada kerja percubaan ini, terbukti bahawa:

1. Transplantasi MALK kepada parut adalah mungkin. 
2. Kaedah transplantasi optimum adalah transplantasi keratinosit pada penutup luka.
3. Permukaan parut itu harus diguna dengan menggunakan dermabrasion pembedahan menggunakan laser Schumann atau pemotong.
4. Di bawah pengaruh MPALK, epitelisasi pesat permukaan tanah rumen berlaku.
5. Tisu parut vascularized yang lebih baik, iaitu, parut yang lebih muda, lebih baik hasil transplantasi keratinocyte.
6. Tisu parut di bawah pengaruh keratinosit yang dipindahkan secara beransur-ansur berubah dan bertukar menjadi tisu (seperti tisu parut yang lebih licin dengan pelekat kulit).
7. Melonggarkan tisu parut secara beransur-ansur bermula dengan lapisan subepidermal. Meningkatkan vascularizationnya, berkas serat kolagen di bahagian atas dan bawah rumen mengambil lokasi yang lebih bising daripada tisu parut tanpa pemindahan sel. Terdapat folikel rambut dan kelenjar sebum. Epidermis dalam strukturnya, selepas lulus fasa hipertrofi, menghampiri epidermis kulit normal.
8. Perubahan yang diperhatikan dikaitkan dengan faktor pertumbuhan keratinocyte, sitokin, yang meningkatkan trophisme tisu parut dan memudahkan transformasi dari tisu berserabut kasar menjadi yang lebih longgar, yang menyebabkan peningkatan dalam jenis parut.

Oleh itu, berdasarkan kajian ini, dapat disimpulkan bahawa kesan menguntungkan keratinosit yang ditransplantasi pada tisu parut, yang mungkin menjadi kepentingan praktikal untuk pemulihan pesakit dengan pelbagai jenis parut.

Kerja-kerja pada tikus juga dibenarkan untuk merumuskan keperluan. Kepada penutup luka, di mana keratinosit ditanam.

Penutup luka hendaklah:

• biokompatibel dengan sel,
• bernafas,
• mempunyai landasan, bentuk bangunan asas yang elastik,
• menjadi hidrofilik,
• sebagai bahan tambahan ubat mengandung ubat antibakteria dan antioksidan tidak toksik kepada sel yang berbudaya.

Hasil klinikal rawatan bioteknologi parut.

Terdahulu, N. Carver et al. (1993) mendapati bahawa pakaian halus adalah terbaik untuk melekat pada luka dan kelangsungan hidup keratinosit, tetapi tidak membenarkan pembentukan epidermis berstatan (matang). Untuk membentuk epidermis berstrata, persekitaran udara diperlukan. Oleh itu, selepas melampirkan lapisan multilayered, penutup luka oklus telah dicadangkan selepas 7-10 untuk mengeluarkan dan menjalankan luka di bawah pembalut kering atau salap larut air. Kita boleh mengatakan bahawa kualiti dan sifat "substrat" di mana sel-sel tumbuh sangat penting untuk keberkesanan transplantasi bahan selular, dan akibatnya untuk hasil kerja doktor. Tetapi tidak ada penutup luka yang ideal hari ini, walaupun banyak pilihan yang dicadangkan (kulit tiruan, kain bukan tenunan karboksiletilselulosa, pelapis fibrin, filem poliuretana yang semipermeable). Masa tidak penting dalam hal ini adalah kos "substrat" (lapisan luka khas), kerana kos yang tinggi meningkatkan jumlah kos rawatan bioteknologi.

Keberkesanan teknologi sel setakat ini dibuktikan, tetapi, malangnya, teknologi ini adalah sangat mahal, terutamanya di negara-negara di mana tidak ada pengeluaran perindustrian komposisi selular. Walau bagaimanapun, negara-negara seperti Amerika Syarikat telah lama menubuhkan sebuah industri untuk pengeluaran bahan selular untuk pemindahan yang dibakar. Khususnya, syarikat BioSurface Technology Inc, sejak 1989, menaikkan 37,000 lapisan berlamina keratinosit, yang telah digunakan untuk merawat 240 pesakit di 79 buah negara di seluruh dunia (R.Odessey, 1992) dengan 1 cm ² kultur sel Kos kira-kira 7-8 $ AS.

Teknologi merawat pelbagai penyakit dan masalah kulit mempunyai beberapa perbezaan, tetapi di tengah-tengah sebarang rawatan dengan sel adalah pengeluaran bahan sel yang berkualiti dan transplantasinya.

Proses ini terdiri daripada langkah-langkah berikut:

• pemilihan kulit daripada yang terjejas (atau daripada penderma),
• pengangkutan flaps kulit ke pusat bioteknologi,
• pengasingan sel-sel lapisan basal dan pendaraban mereka,
• pembentukan lapisan berbilang keratinocytes (IPC).
• pemindahan kultur sel.

Masalah utama dalam rawatan dengan transplantasi strata keratinocyte multilayered adalah keperluan untuk sel-sel yang berdaya maju di semua tahap transplantasi sel. Kepingan kulit untuk mengasingkan sel-sel autologous atau allogeneik sepatutnya nipis, kerana dalam kes ini, mereka lebih mudah untuk memisahkan menggunakan kaedah mekanikal dan enzim dan untuk mendapatkan penggantungan sel hidup untuk pertumbuhan. Mereka boleh didapati dengan memotong dermatome atau menggunakan kulit kelopak mata, kulup, permukaan dalaman bahu. Memandangkan sel-sel itu sensitif kepada halogens (klorin, iodin), hidrogen peroksida, ia tidak boleh digunakan dalam rawatan kulit pada masa mengambil bahan.

Hasil kuantitatif dan kualitatif sel dari kraf kulit dan keberkesanan penanaman mereka juga bergantung pada status kesihatan dan usia penderma. Di samping itu, spesimen biopsi kulit perlu dihantar ke makmal secepat mungkin dan dalam keadaan yang sesuai (persekitaran, suhu) dihantar ke makmal yang disahkan dan diakreditasi.

Medium atau sederhana Eagle dengan tambahan serum sapi 10%, medium DMEM ditambah dengan 5% serum bovine janin dan antibiotik boleh digunakan untuk menyimpan dan mengangkut flaps kulit.

Di makmal sitologi, biopsi kulit pertama secara mekanikal dibahagikan kepada kepingan kecil, maka pemprosesan serpihan kulit dilakukan dengan bantuan enzim: trypsin, collagenase, dyspase, dsb.

Di bawah tindakan enzim, kemusnahan oleh desmosomes berlaku dan keratinosit dilepaskan ke medium sebagai sel atau agregat yang berasingan yang terdiri daripada bilangan sel yang berlainan. Untuk kebudayaan, hanya keratinocytes basal yang digunakan yang ditanam di media khusus dalam inkubator yang mengandungi 5% CO, Dalam hidangan petri atau dalam botol pada t = 37 ° C. Dalam masa 48 jam, pembentukan koloni keratinocyte diperhatikan, yang secara beransur-ansur bertumpu kepada monolayer. Selepas mendapat sejumlah sel yang mencukupi, penggantungan yang terhasil disebarkan pada penutup luka yang disediakan untuk tujuan ini dan dimasukkan ke dalam hidangan Petri. Dari penggantungan, pertama satu monolayer dan kemudian lapisan multilayered keratinocytes terbentuk. Secara skematis, peringkat proses penanaman keratinocyte ditunjukkan dalam Rajah. 12 (33.43.54.65).

Pembentukan pembentukan keratinocyte multilayer sesuai untuk transplantasi biasanya mengambil masa 7-10 hari. Kadang-kadang tempoh ini lebih lama, yang bergantung kepada kualiti bahan sumber (usia, kesihatan penderma, ketepatan bahan, kualiti media yang digunakan, dan sebagainya). Sekiranya lapisan berlebihan berlebihan, maka pada permukaannya mungkin terdapat sel-sel dengan fenomena apoptosis yang tidak sesuai untuk transplantasi. Hidangan Petri, dengan tumbuh di dalamnya pada penutup luka oleh lapisan berbilang keratinocytes (IPC), dihantar ke klinik dalam bekas khusus pada suhu tidak lebih rendah daripada + 15 ° C

Kaedah Hijau yang diubahsuai untuk mengembangkan IPC

Dalam kerja kami sebagai lapisan luka, kami menggunakan cambric berbilang berlapis, meninggalkan filem polypore yang kami mula bekerja dalam eksperimen dengan tikus. Oleh itu, strata keratinocyte multilayered telah ditanam oleh kami pada batch prefat dan steril, walaupun ia juga bukan penutup luka yang optimum.

Kajian klinikal dijalankan pada sukarelawan dengan mematuhi norma etika yang perlu: menandatangani perjanjian dan persetujuan yang dimaklumkan.

1. Budaya sendiri (autologous) dan diambil dari sel-sel bank (allogenic) keratinosit yang digunakan.
2. Keratinocytes sendiri diperoleh dari sekeping potongan kulit dari dalam bahu pesakit.
3. Operasi dermabrasion parut telah dilakukan dengan bantuan termokopel, cakera berputar dan laser erbium.
4. Kumpulan pesakit dengan parut normotropik, hipotropik dan hipertropik diambil.

Proses teknologi untuk aplikasi teknologi selular untuk meningkatkan jenis parut kulit terdiri daripada peringkat berikut:

1. Pemilihan pesakit.
2. Jelaskan intipati rawatan, masa untuk mendapatkan hasil yang diharapkan, menandatangani perjanjian dan persetujuan yang dimaklumkan.
3. Pelantikan pesakit selama 2-3 minggu sebelum selmevit pembedahan dengan 1t. 3 kali sehari, zinkteral pada 1t. 3 kali sehari.
4. Mengambil sekeping kulit 2.0 cm panjang dan 0.7-1.0 cm lebar dari permukaan dalaman bahu, tinggi, hampir di bahagian bawah kawasan axillary, untuk mendapatkan keratinosit autologous.
5. Sekiranya pesakit enggan mengasingkan keratinosit mereka sendiri kerana kemungkinan mendapatkan parut linear di permukaan bahu, bahan selular diambil dari bank sel (kerogenosit semuaogenik).
6. Keratinocytes telah diasingkan dan ditanam dalam keadaan makmal yang diperakui untuk kerja jenis ini.
7. Selepas menerima IPC yang mencukupi untuk pemindahan, hari pembedahan diberikan kepada parut di klinik, di mana bahan dibawa ke dalam bekas khas dalam hidangan Petri.
8. Operasi dermabrasion rumen, haemostasis dijalankan, permukaan tanah dibasuh dengan larutan garam steril, kering, selepas itu IPC ditransplantasikan pada batiste steril "sel ke bawah". Iaitu, sel-sel yang berada di bahagian atas MIC lebih rendah, bersebelahan dengan permukaan yang digilap.
9. Filem steril ditapis di bahagian atas, yang dipasang pada kulit dengan pembalut elastik atau bantuan elastik Omnifix. Daripada filem itu, salutan luka acuh tak acuh yang mengandungi silikon, contohnya Mepitel, Mepiform, plat gel silikon, juga boleh digunakan.

Selepas 5-7 hari, salutan filem atau silikon dikeluarkan. Pada masa ini, semua keratinosit perlu merangkak ke bekas parut yang digilap dan melekat pada permukaannya.

10. Persekitaran basah yang dibuat di bawah lapisan filem dan silikon secara aktif menyumbang kepada ini. Pembaptisan baki pada bekas luka dari titik ini boleh dibersihkan dengan gel curiosa atau kitosan. Hasilnya, pada hari ke-2, kerak yang padat dicipta, yang, untuk kemudahan pesakit, lebih baik untuk memperbaiki dengan plaster yang tahan lentur, telap udara, contohnya Omnifix. Kerak bernafas membolehkan epidermis yang baru terbentuk untuk membezakan dan berubah menjadi yang matang.

Bergantung pada jenis parut dan kedalaman pengisaran, pakaian ditolak selepas 8-10 hari. Epidermis pada masa ini mempunyai 30-40% lebih lapisan selular daripada kulit biasa. Membran basal tidak terbentuk. Keratinosit daripada epiderma yang mengental membebaskan jisim molekul aktif secara biologi ke dalam tisu parut.

Kejayaan rawatan bioteknologi parut sebahagian besar bergantung kepada cara mereka dijaga dalam tempoh selepas operasi. Kultur sel adalah "jenis tender" penutup luka dan pada awal tempoh selepas pemindahan, BMD dengan mudah boleh terlepas dari tisu yang mendasari. Oleh itu, pesakit dinasihatkan untuk menjaga parut selepas pembedahan. Untuk 8-9 bulan, jangan gosok dan mudah bekerja dengan air rebus yang sejuk untuk mengelakkan merobek epidermis nipis yang baru dibuat yang tidak mempunyai pegangan yang ketat dengan tisu yang mendasari.

Nota:

Sebelum pembedahan dan semasa penggunaan dermabrasion oksida terhalogen dan bahan pengawet (yodopiron, sulyodopiron, iodinol, yodinat, chlorhexidine, hidrogen peroksida) adalah dibenarkan sebelum diubah kletok- sememangnya contraindicated kerana kesan sitotoksik mereka. Toksik ke sel juga metilena biru. Hijau terang.

Untuk mengelakkan jangkitan, terutamanya apabila bekerja dengan parut hipertrofik, adalah mungkin untuk merawat medan operasi dengan neomycin sulfate, polymyxin atau gentamicin. Mereka tidak menggunakan kesan sitotoksik pada keratinosit.

Hasil daripada rawatan ini, kesan triple dicapai.

1. Penjajaran permukaan rumen.
2. Buat lapisan di atasnya epidermis baru, ketebalan biasa.
3. Transformasi tisu parut menjadi seperti dermoid akibat tindakan sitokin, faktor pertumbuhan dan molekul aktif biologi yang lain, yang dirahsiakan oleh sel-sel yang dipindahkan dan dirangsang oleh mereka keratinosit, fibroblas dan makrofag.

Parut menjadi kurang ketara, lebih kenyal, liang-liang muncul di dalamnya, rambut puff, pigmentasi dapat dipulihkan kerana kehadiran melanosit di MPC.

Walau bagaimanapun, semua momen positif dalam cicatrix tidak datang dengan segera. Dalam hal ini, adalah perlu untuk memberi amaran kepada pesakit. Bahawa proses transformasi tisu parut ke dalam dermis adalah perlahan dan hasil optimum rawatan sedemikian boleh dijangka tidak lebih awal daripada 10-14 bulan. Sebaik sahaja selepas berpakaian ditolak, permukaan yang dipoles mempunyai polychrome yang jelas, proses pengisaran lebih cerah. Sekurang-kurangnya kerosakan pada kulit berlaku apabila mengisar parut normotropik dengan laser erbium. Warna parut dan kulit sekitarnya dipulihkan dalam tempoh 3 hingga 8 minggu. Walaupun ada langkah berjaga-jaga, kadang-kadang terdapat hyperpigmentation pasca operasi, yang boleh berlangsung secara bebas selama beberapa bulan.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]