Diagnosis herpes

Diagnosis herpes adalah berdasarkan pengasingan virus klasik pada kultur sel sensitif, kaedah imunofluoresensi dan serologi, pemeriksaan kolposkopik, dan penggunaan kaedah biologi molekul moden (PCR, hibridisasi titik), yang membolehkan mendiagnosis keseluruhan kumpulan virus herpes, termasuk jenis HHV-6 dan HHV-7.

Kaedah diagnostik makmal untuk jangkitan herpes

Kaedah utama yang bertujuan untuk mengasingkan HSV atau mengesan zarah virus dan/atau komponennya	Kaedah tambahan bertujuan untuk mengesan antibodi kepada HSV dalam cecair biologi badan manusia
Pengasingan HSV dalam kultur sel dan haiwan yang sensitif Mikroskopi elektron langsung dan imun Varian langsung dan tidak langsung IPA IFA Kaedah biologi molekul Tindak balas aglutinasi lateks	Tindak balas peneutralan RSC Penentuan antibodi kepada protein bukan struktur HSV-1,2

Telah ditunjukkan bahawa dalam 76% pesakit herpes genital (GH) disebabkan oleh HSV-2, dan dalam 24% - oleh jenis HSV-1. Selain itu, GH sebagai monoinfeksi hanya berlaku dalam 22% pesakit, dalam 78% kes persatuan mikrob dikesan. Dalam 46% individu, parasitocenosis yang disebabkan oleh dua patogen dikesan, termasuk klamidia dikesan dalam 40% kes. Gardnerella, Trichomonas, dan gonococci kurang kerap dikesan dalam smear.

Dalam 27% pesakit, parasitocenosis diwakili oleh tiga patogen, dalam 5.2% - oleh empat patogen. Lebih-lebih lagi, gabungan klamidia dengan gardnerella dan kulat Candida paling kerap diperhatikan. Data ini membuktikan keperluan untuk pemeriksaan bakteriologi menyeluruh pesakit dengan GH untuk mengenal pasti kombinasi agen patogen, serta kajian mendalam tentang patogenesis jangkitan campuran saluran urogenital, yang akan membolehkan terapi kompleks yang berbeza untuk jangkitan herpes.

Bahan yang dikaji untuk pengasingan HSV bergantung pada penyetempatan lesi herpetik

Penyetempatan lesi	Kandungan vesikel	Pengikisan sel				CSF	Aspirasi bronkial	Biopsi	Darah
		1	2	3	4
Kulit	+								+
Mata			+						+
Kemaluan				+					+
Dubur	+				+				+
Mulut	+	+							+
SSP	+					+		+	+
Paru-paru		+					+		+
Hati								+	+
Herpes kongenital	+	+	+				+		+

Kaedah diagnostik makmal jangkitan sitomegalovirus

Kaedah	Masa yang diperlukan untuk mendapatkan keputusan	Nota
VIROLOGIKAL
Mikroskopi elektron	3 jam	Tidak begitu mudah diakses
Pengasingan virus dalam kultur sel (VCI)	4-20 hari	Standard, Perlahan
Pewarnaan imunofluoresensi AG awal menggunakan antibodi monoklonal	6 jam	Kurang spesifik
CYTOLOGICAL	2-3 jam	Kurang spesifik
SEROLOGI
RSC	2 hari	Standard
RGA	1 hari	Intensif buruh
REEF	6 jam	Mudah, khusus
NRIF	6 jam	Sukar
RIMP	6 jam	Sukar
ELISA (IgM, DO)	6 jam	Cepat, ringkas
Immunoblot	6 jam	Mahal
BIOLOGI MOLEKUL
MG	5-7 hari	Mahal, intensif buruh
PCR	3 jam	Mahal

Kaedah diagnostik virus herpes zoster

Kaedah diagnostik	Teknik makmal
TIDAK LANGSUNG
Pemilihan	Kultur tisu, embrio ayam, haiwan makmal, kultur bersama dengan sel permisif atau virus pembantu
Pengenalpastian isolat	Tindak balas peneutralan, RSC, IF, PIEF, tindak balas pemendakan terpencil, aglutinasi, IF
TERUS
Sitologi	Calitan: imunofluoresensi warna
Histologi	Patomorfologi sel
Struktur	Mikroskopi embrio, mikroskopi immunoelectron
Penentuan antigen	JIKA, PIEF, RIM, IFA
Penentuan pengeluaran antibodi tempatan	Ig M, Ig G, Ig A: ELISA, RIA
Pendekatan biologi molekul	Hibridisasi molekul, PCR

Diagnosis makmal jangkitan yang disebabkan oleh virus herpes zoster

Masalah diagnostik	Kaedah	Hasil yang dijangkakan
Jangkitan primer akut	1	Pengesanan dalam 2 jam
	2	Tahap antibodi meningkat secara perlahan
	3	Hadir 3 hari selepas jangkitan
Jangkitan akut diaktifkan semula	1	Pengesanan UUU selepas 2 jam
	2	Tahap antibodi meningkat secara perlahan
	4	Hadir 4 hari selepas ruam muncul

1. penentuan vesikel VEGF dalam cecair;
2. serologi: CSC, ELISA, bertujuan untuk pengesanan
3. serologi: ELISA bertujuan untuk mengesan IgM;
4. serologi: ELISA bertujuan untuk mengesan IgA, IgM.

Kaedah untuk menunjukkan tindak balas imun terhadap jangkitan virus herpes zoster

Pendekatan	Kaedah
Pengesanan peningkatan titer antibodi dalam sera kedua	RSK, RTGA, RPGA, IF tindak balas peneutralan, RIM, ELISA
Pengesanan antibodi spesifik kelas Ig G, Ig A dalam sampel serum pertama	ELISA, JIKA, RIM, aglutinasi lateks

Tafsiran hasil pemeriksaan serologi sera pesakit untuk jangkitan herpesvirus (ELISA)

Nama jangkitan/penanda	Nilai ambang purata untuk jangkitan
	Keputusan analisis	Tafsiran
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 U/ml) IgM Anti-CMV (100-300%)	Positif 1-6 Positif 6-10 Positif >10 Positif Negatif 100-300 Negatif <90 Meragukan 90-100	Remisi Memburukkan penyakit Fasa akut penyakit Tiada jangkitan (penyakit) Fasa akut penyakit Ulangi analisis dalam 2-3 minggu
Herpes simplex 1,2 serotypes Anti-HSV 1/2 jumlah (100-900%)	Positif 100-400 Positif 400-800 Positif >800 Negatif <100	Remisi Memburukkan penyakit Fasa akut penyakit Tiada jangkitan (penyakit)

Jadual membentangkan kaedah utama diagnostik makmal jangkitan herpesvirus, serta bahan biologi yang disyorkan yang diperiksa apabila mengasingkan HSV, dengan mengambil kira penyetempatan lesi herpetik.

Mengasingkan virus herpes simplex dan CMV yang boleh dipercayai dengan menjangkiti kultur sel sensitif. Oleh itu, semasa pemeriksaan virologi 26 pesakit semasa tempoh kambuh, HSV telah diasingkan pada budaya sel Vero yang sensitif dalam 23 kes (88.4%). Kultur yang dijangkiti menunjukkan gambaran tindakan sitopatik yang tipikal untuk HSV - pembentukan sel gergasi multinuklear atau pengumpulan sel bulat dan membesar dalam bentuk kelompok. Dalam 52.1% kes, fokus tindakan sitopatik virus boleh dikesan sudah 16-24 jam selepas jangkitan. Dengan 48-72 jam pengeraman kultur yang dijangkiti, peratusan bahan yang menyebabkan kemusnahan khusus sel meningkat kepada 87%. Dan hanya dalam 13% kes, keputusan positif dikesan 96 jam selepas jangkitan atau lebih atau semasa berulang kali.

Kaedah diagnostik makmal jangkitan herpes umum

Kaedah utama yang bertujuan untuk mengesan (mengasingkan) virus herpes, zarahnya dan komponennya	Kaedah tambahan bertujuan untuk mengesan antibodi kepada virus herpes dalam cecair biologi, mengesan pergeseran enzimatik dalam serum darah
Pengasingan virus herpes pada sel sensitif dan kultur haiwan Mikroskopi elektron langsung dan imun Varian langsung dan tidak langsung kaedah immunoperoxidase Varian langsung dan tidak langsung kaedah antibodi pendarfluor Varian immunoassay enzim fasa pepejal Varian kaedah hibridisasi molekul (DNA-DNA) Tindak balas rantai polimerase Tindak balas aglutinasi lateks	Ujian peneutralan Ujian penetapan pelengkap Ujian aglutinasi lateks Versi tidak langsung kaedah antibodi pendarfluor Versi tidak langsung kaedah imunoperoksidase Varian immunoassay enzim fasa pepejal Kaedah blotting imun Kaedah penetapan pelengkap jejari Penentuan tahap aminotransferase alanin dan aspartat

Kaedah serologi digunakan untuk mendiagnosis mononukleosis berjangkit (jangkitan yang disebabkan oleh EBV). Tindak balas Paul-Bunnell dengan sel darah merah ram, titer diagnostik 1:28 atau lebih tinggi dalam satu ujian serum darah, atau peningkatan 4 kali ganda dalam antibodi apabila memeriksa serum berpasangan. Tindak balas Hoff-Bauer dengan penggantungan 4% sel darah merah kuda yang diformalkan digunakan. Hasilnya diambil kira selepas 2 minit; dalam mononukleosis berjangkit, tindak balas adalah sangat spesifik.

Pada masa ini, kaedah enzim immunoassay (EIA) untuk mendiagnosis mononukleosis berjangkit sedang dibangunkan. Dalam kes ini, antibodi IgG dan IgM dalam serum pesakit ditentukan dengan mengeramkannya dengan limfoblas yang dijangkiti EBV, diikuti dengan rawatan dengan antibodi pendarfluor. Dalam tempoh akut penyakit ini, antibodi terhadap antigen kapsid virus ditentukan dalam titer 1:160 dan lebih tinggi.

Apabila menggunakan beberapa sistem ujian komersil yang diimport, ELISA boleh mengesan: antibodi kepada antibodi sampul EBV, antibodi kepada antigen awal EBV, jumlah antibodi kepada antigen awal EBV, ditentukan dalam fasa akut penyakit kedua-dua dalam nukleus dan dalam sitoplasma sel, dan antibodi terhad kepada EBV awal, yang ditentukan dalam fasa akut penyakit pada EB, antibodi terhad kepada nukleus awal penyakit dan kedua-duanya dalam nukleus sel. antigen, ditentukan pada ketinggian penyakit hanya dalam sitoplasma sel, dan antibodi kepada antigen nuklear EBV. Penggunaan sistem ujian ini membolehkan diagnostik pembezaan beberapa penyakit yang berkaitan dengan EBV.

Selepas ujian ELISA positif yang mendedahkan antibodi kepada EBV, tindak balas imunoblotting pengesahan dilakukan, yang menentukan kehadiran antibodi terhadap protein penanda EBV individu (protein p): p23, p54, p72 (kehadiran protein ini menunjukkan kemungkinan pembiakan EBV), p 138. Kaedah makmal di atas juga digunakan untuk memantau keberkesanan rawatan.

Sensitiviti kaedah virologi adalah 85-100%, kekhususan adalah 100%, masa kajian adalah 2-5 hari. Kaedah imunofluoresensi langsung (DIF) dengan antibodi poliklonal atau monoklonal terhadap HSV-1 dan HSV-2 sering digunakan dalam kerja amali. Kaedah DIF agak mudah dihasilkan di makmal klinikal biasa, tidak mahal, sensitiviti melebihi 80%, kekhususan adalah 90-95%. Mikroskopi imunofluoresensi mendedahkan kehadiran kemasukan sitoplasma, ciri morfologi, peratusan sel yang dijangkiti dalam smears-scrapings dari uretra, saluran serviks, serviks, rektum.

Kaedah PIF memberikan idea tentang sifat morfologi sel dan perubahan dalam penyetempatan antigen HSV. Sebagai tambahan kepada tanda langsung kerosakan sel oleh virus herpes (pengesanan luminescence tertentu), terdapat tanda tidak langsung jangkitan herpes mengikut data PIF:

• pengagregatan bahan nuklear, detasmen karyolemma;
• kehadiran nukleus "lubang" yang dipanggil, apabila hanya satu karyolemma kekal dari nukleus sel;
• kehadiran kemasukan intranuklear - Badan Cowdry.

Apabila melakukan PIF, doktor menerima bukan sahaja penilaian kualitatif tetapi juga penilaian kuantitatif keadaan sel yang dijangkiti, yang kami gunakan untuk menilai keberkesanan terapi antiviral dengan acyclovir (AC). Oleh itu, 80 pesakit dengan herpes genital mudah (GH) telah diperiksa menggunakan kaedah PIF dalam dinamik. Telah ditunjukkan bahawa jika sebelum rawatan dengan acyclovir, 88% pesakit mempunyai peratusan tinggi sel yang dijangkiti (50-75% dan lebih tinggi) dalam smear, maka selepas satu kursus acyclovir, sel-sel yang sihat dikesan dalam smear 44% pesakit, dalam 31% kes, sel yang dijangkiti tunggal telah dicatatkan, dan dalam 25% daripada pesakit terdapat sehingga 1%.

Kandungan sel yang dijangkiti dalam smear (tindak balas PIF) pesakit dengan herpes genital yang dirawat dengan asiklovir

Tempoh sakit	Peratusan kandungan dalam smear
	Sel yang dijangkiti					Sel normal
	Lebih daripada 75%	50-75%	40-50%	10%	Sel tunggal dalam bidang pandangan
Kambuh (sebelum rawatan)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisi (selepas rawatan)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Menggunakan PIF dan kaedah hibridisasi titik selama bertahun-tahun, telah diperhatikan bahawa keputusan kajian bertepatan dalam hampir 100% kes. Perlu diingatkan bahawa untuk meningkatkan kebolehpercayaan diagnosis herpes, terutamanya dalam kes herpes subklinikal dan bentuk manifestasi rendah, disyorkan untuk menggunakan 2-3 kaedah diagnostik makmal dalam kerja, terutamanya apabila memeriksa wanita hamil, wanita dengan sejarah obstetrik yang tidak baik, dan orang yang mempunyai diagnosis ginekologi yang tidak ditentukan.

Oleh itu, dalam diagnostik PCR jangkitan virus dan bakteria saluran urogenital, adalah perlu untuk menilai keputusan positif yang diperoleh dengan mengambil kira anamnesis, kehadiran (atau ketiadaan) gejala klinikal tertentu penyakit ini. Sekiranya klamidia dikesan menggunakan PCR, maka dalam kes ini terdapat kebarangkalian jangkitan yang tinggi dan isu terapi boleh diselesaikan dengan sewajarnya. Dalam kes pengesanan mycoplasmas (ureaplasmas), yang merupakan mikroorganisma oportunistik, kajian budaya tambahan diperlukan untuk mengesahkan diagnosis, iaitu, menyemai bahan dari pesakit pada kultur sel sensitif. Hanya jika keputusan positif diperolehi dalam analisis budaya kita boleh bercakap tentang pengesahan makmal diagnosis mycoplasmosis. Kaedah yang sama akan membolehkan, jika perlu, untuk menentukan sensitiviti mycoplasmas terpencil kepada bentuk dos yang kerap digunakan (antibiotik, fluoroquinolones, dll.).

Jangkitan serentak dengan beberapa virus dari keluarga Herpesviridae adalah mungkin. Kami sering mengesan jangkitan satu pesakit dengan virus HSV-1, HSV-2 dan CMV. Pesakit dengan manifestasi klinikal dan makmal IDS sekunder (onkohematologi, onkologi, pesakit yang dijangkiti HIV) secara ketara lebih kerap dijangkiti beberapa virus herpes. Oleh itu, telah ditunjukkan bahawa gangguan klinikal dan imunologi yang berkembang dalam jangkitan HIV disertai dengan peningkatan bilangan virus herpes yang dikesan oleh kaedah hibridisasi molekul. Dalam kes ini, yang paling penting secara prognostik boleh dianggap sebagai pengesanan serentak kompleks DNA jenis HSV-1, CMV dan HHV-6.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ]