Diagnosis herpes

Diagnosis herpes adalah berdasarkan kelakuan menumpahkan virus klasik dalam budaya sel sensitif, immunofluorescence dan kaedah serologi, menjalankan kajian colposcopic menggunakan kaedah molekul biologi moden (PCR, dot-penghibridan), yang membolehkan anda untuk mendiagnosis semua kumpulan herpesvirus, termasuk HHV-6 dan HHV-7 jenis.

Kaedah makmal diagnosis jangkitan herpetic

Kaedah utama yang bertujuan untuk menyembunyikan HSV atau mengesan zarah virus dan / atau komponennya	Kaedah bantuan bertujuan untuk mengesan antibodi kepada HSV dalam cecair biologi badan manusia
Pengasingan HSV dalam budaya dan sel-sel haiwan yang sensitif Microscopy langsung dan Immune Electron Pilihan MFA langsung dan tidak langsung IFA Kaedah biologi molekul Tindak balas aglutinasi lateks	Tindak balas peneutralan RSK Penentuan antibodi kepada protein bukan struktur HSV-1,2

Ia menunjukkan bahawa 76% pesakit mempunyai herpes kemaluan (GH) yang disebabkan oleh HSV-2, dan dalam 24% - jenis HSV-1. Dan GG sebagai monoinfection hanya berlaku pada 22% pesakit, dalam 78% kes, persatuan mikrob telah dikesan. Dalam 46% pesakit, parasitocenosis yang disebabkan oleh dua patogen dikesan, termasuk klamidia dikesan dalam 40% kes. Kurang kerap di dalam smear ditentukan gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

Dalam 27% pesakit, parasitosenosis diwakili oleh tiga, dan 5.2% oleh empat patogen. Selain itu, kombinasi klamidia dengan Gardnerella dan kulat genus Candida lebih sering dicatat. Data-data ini mewajarkan keperluan untuk pemeriksaan bakteriologi menyeluruh pesakit YY untuk mengenalpasti kombinasi agen patogenik, serta kajian mendalam daripada patogenesis jangkitan campuran saluran urogenital, yang akan membolehkan terapi kompleks berbeza jangkitan HSV.

Bahan yang perlu dikaji dalam pengasingan HSV bergantung kepada penyetempatan lesi herpetik

Penyetempatan lesi	Kandungan vesikel	Pengikisan sel				SDC	Aspirate dari bronkus	Bioptat	Darah
		1	2	3	4
Kulit	+								+
Mata			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Mulut	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Ringan		+					+		+
Hati								+	+
Herpes kongenital	+	+	+				+		+

Kaedah makmal diagnosis jangkitan sitomegalovirus

Kaedah	Masa diperlukan untuk mendapatkan hasil	Nota
VIRUSOLOGICAL
Mikroskop elektron	3 jam	Berdebar-debar
Pengasingan virus dalam budaya sel (CPD)	4-20 hari	Standard, Lambat
Pewarnaan immunofluoresen awal AH dengan antibodi monoklonal	6 jam	Kurang spesifik
CYTOLOGICAL	2-3 jam	Kurang spesifik
SEOROGIKAL
RSK	2 hari	Standart
Ssubsistence	1 hari	Terlibat
REEF	6 jam	Mudah, khusus
NFIF	6 jam	Complicated
RIMF	6 jam	Complicated
IFA (IgM, TO)	6 jam	Cepat, mudah
Immunoblot	6 jam	Mahal
MOLEKUL-BIOLOGI
MG	5-7 hari	Mahal, memakan masa
PCR	3 jam	Mahal

Kaedah untuk mendiagnosis virus herpes zoster

Kaedah Diagnostik	Teknik makmal
TIDAK LANGSUNG
Peruntukan	Kain fabrik, embrio ayam, haiwan makmal, penanaman bersama dengan sel-sel permisif atau virus penolong
Pengenalpastian isolat	Reaksi peneutralan, DSC, JIKA, IPPE, tindakbalas pengasingan, aglutinasi, IF
LANGSUNG
Cytology	Smear: immunofluorescence warna
Histologi	Pathomorphology of the cell
Struktur	Mikroskopi embrio, mikroskopi imunoelektronik
Penentuan antigen	JIKA, PIÉF, RIM, IFA
Penentuan pengeluaran antibodi tempatan	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Pendekatan Biologi Molekul	Hibridisasi molekul, PCR

Diagnosis makmal terhadap jangkitan yang disebabkan oleh virus herpes zoster

Masalah diagnostik	Kaedah	Keputusan Yang Diharapkan
Jangkitan utama akut	1	Pengesanan selepas 2 jam
	2	Tahap antibodi tumbuh dengan perlahan
	3	Hadir 3 hari selepas jangkitan
Akut mengaktifkan semula jangkitan	1	Pengesanan ULV dalam masa 2 jam
	2	Tahap antibodi tumbuh dengan perlahan
	4	Hadir 4 hari selepas kemunculan ruam

1. penentuan dalam cecair vesikel WIEF;
2. serologi: DSC, ELISA, bertujuan mengenal pasti
3. Serologi: ELISA, bertujuan untuk mengesan IgM;
4. serologi: ELISA, bertujuan untuk mengesan IgA, IgM.

Kaedah untuk menunjukkan tindak balas imun jangkitan akibat virus herpes zoster

Pendekatan	Kaedah
Pengesanan peningkatan titer antibodi dalam sera kedua	Reaksi neutralisasi RSK, RTGA, RPGA, RIM, ELISA
Pengesanan Ig G, Ig A spesifik antibodi kelas dalam sampel serum pertama	IFA, JIKA, RIM, lateks-aglutinasi

Tafsiran hasil pemeriksaan serologi sera pesakit terhadap jangkitan herpesvirus (ELISA)

Nama jangkitan / penanda	Ambang purata untuk jangkitan
	Hasil analisis	Tafsiran
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	1-6 6-10 Positif Positif Positif> 10 Negatif Positif Negatif 100-300 <90 Ragu 90-100	Remisi Keruntuhan penyakit Fasa akut penyakit Tiada jangkitan (penyakit) Fasa akut penyakit Ulangi analisis selepas 2-3 minggu
Herpes mudah 1,2 serotipe Anti-HSV 1/2 total. (100-900%)	Positif 100-400 Positif 400-800 Positif> 800 Negatif <100	Remisi Keruntuhan penyakit Fasa akut penyakit Tiada jangkitan (penyakit)

Jadual ini membentangkan kaedah utama diagnostik makmal bagi jangkitan herpesvirus, dan juga mengesyorkan bahan biologi yang dikaji dalam pengasingan HSV, dengan mengambil kira penyetelan lesi herpetik

Boleh dipercayai adalah peruntukan herpes simplex dan CMV melalui jangkitan kultur sel sensitif. Oleh itu, dalam pemeriksaan virologi sebanyak 26 pesakit dalam tempoh berulang, HSV diasingkan pada budaya sel Vero sensitif dalam 23 kes (88.4%). Dalam budaya yang dijangkiti, corak ciri-ciri tindakan sitopatik HSV diperhatikan-pembentukan sel gergasi multinucleated atau pengumpulan sel bulat dan diperbesarkan dalam bentuk tandan. Dalam 52.1% kes, adalah mungkin untuk mengesan fokus cytopathic virus oleh 16-24 jam selepas jangkitan. Dengan 48-72 jam pengeraman budaya yang dijangkiti, peratusan bahan yang menyebabkan kemusnahan sel spesifik meningkat kepada 87%. Dan hanya dalam 13% kes, keputusan positif dikesan 96 jam selepas jangkitan dan lebih atau dengan pengulangan yang berulang.

Kaedah diagnosis makmal bagi jangkitan herpetik umum

Kaedah utama bertujuan untuk mengesan (pengasingan) herpesvirus, zarah mereka dan komponen mereka	Kaedah tambahan bertujuan untuk mengesan antibodi kepada virus herpes dalam cecair biologi, mengesan perubahan enzimatik dalam serum darah
Pengasingan Herpes virus pada kultur sel terdedah dan haiwan elektron langsung dan imun mikroskop kaedah immunoperoxidase langsung dan tidak langsung penjelmaan langsung dan tidak langsung pilihan teknik antibodi pendarfluor pilihan ELISA Perwujudan-Perwujudan molekul (DNA-DNA) hybridizing Polymerase Chain Reaction Reaksi lateks agglutination	Peneutralan reaksi pelengkap penetapan reaksi getah agglutination tidak langsung pendarfluor kaedah antibodi penjelmaan tidak langsung kaedah immunoperoxidase varian Perwujudan-Perwujudan ELISA Menghubungi imun isap radial penetapan Menghubungi pelengkap Penentuan tahap alanine dan aspartik

Untuk mendiagnosis mononukleosis berjangkit (jangkitan yang disebabkan oleh VEB), kaedah serologi digunakan. Reaksi Paul-Bunnelya dengan eritrosit biri-biri, titer daripada 1:28, diagnostik dan ke atas bagi serum kajian tunggal, atau peningkatan antibodi 4 kali ganda apabila memeriksa sera berpasangan. Gunakan reaksi Goff-Bauer dengan penggantungan 4% sel darah merah rasmi kuda. Hasilnya diambil kira selepas 2 minit, dengan mononucleosis berjangkit reaksi sangat spesifik.

Pada masa ini, satu enzyme immunoassay (ELISA) sedang dibangunkan untuk mendiagnosis mononukleosis berjangkit. Dalam kes ini, antibodi IgG dan IgM dalam serum pesakit ditentukan dengan menginkubkannya dengan limfobil yang dijangkiti EBV, diikuti dengan rawatan dengan antibodi pendarfluor. Dalam tempoh yang teruk penyakit ini, antibodi kepada antigen kapsid virus ditentukan dalam titer 1: 160 dan ke atas.

Apabila menggunakan beberapa diimport sistem ujian komersial di IFA boleh mengenal pasti: antibodi kepada semut Egan EBV antibodi sampul surat kepada antigen awal EBV, antibodi keseluruhan kepada antigen awal EBV, yang ditentukan dalam fasa akut penyakit ini dan dalam nukleus dan sitoplasma, dan antibodi yang terhad EBV awal, telah dipilih dalam fasa akut penyakit ini dan dalam nukleus dan sitoplasma sel, disempadani antibodi untuk EBV awal antigen, yang ditentukan di tengah-tengah penyakit hanya dalam sitoplasma sel-sel, dan antibodi untuk antigen nuklear EBV. Penggunaan sistem ujian ini membolehkan diagnosis pembezaan beberapa penyakit yang dikaitkan dengan EBV.

Selepas positif ELISA untuk mengenalpasti antibodi EBV memberi immunoblot balas mengesahkan, yang mengesan kehadiran antibodi untuk memisahkan protein EBV penanda (p-protein): P23, P54, p72 (kehadiran protein yang menunjukkan kemungkinan pembiakan EBV), ms 138. Said kaedah makmal di atas digunakan untuk mengawal keberkesanan rawatan.

Kepekaan kaedah virologi adalah 85-100%, kekhususan adalah 100%, masa kajian adalah 2-5 hari. Selalunya dalam amalan, kaedah imunofluoresensi langsung (PIF) dengan antibodi poliklonal atau monoklonal terhadap HSV-1 dan HSV-2 digunakan. Kaedah UIF boleh dengan mudah diterbitkan semula dalam makmal klinikal konvensional, ia tidak mahal, sensitiviti melebihi 80%, spesifisinya adalah 90-95%. Oleh mikroskop ujian berbentuk mendedahkan kehadiran benda asing cytoplasmic, ciri-ciri morfologi, peratusan sel yang dijangkiti dalam calitan, scrapes urethral, terusan serviks, serviks, rektum.

Kaedah UIF memberikan idea sifat-sifat morfologi sel dan perubahan penyetempatan antigen HSV. Sebagai tambahan kepada tanda-tanda langsung kerosakan sel oleh virus herpes (pengesanan pendengaran spesifik), terdapat tanda-tanda tidak langsung dari jangkitan herpetik mengikut data UIF:

• pengagregatan bahan nuklear, pengelupasan karyoolma;
• kehadiran apa yang dipanggil. "lubang" nukleus, apabila hanya satu karyolemma yang kekal dari nukleus sel;
• kehadiran kemasukan intranuklear - anak lembu Caudry.

Apabila menetapkan doktor UIF menerima bukan sahaja berkualiti, tetapi juga penilaian kuantitatif sel-sel yang dijangkiti yang kita telah digunakan untuk menilai keberkesanan terapi antivirus dengan acyclovir (AC). Oleh itu, 80 pesakit dengan herpes genital yang mudah (GG) diperiksa oleh kaedah UIF dalam dinamik. Ia menunjukkan bahawa jika, sebelum rawatan dengan acyclovir dalam calitan 88% daripada pesakit yang mempunyai peratusan yang tinggi sel yang dijangkiti (50-75% ke atas), selepas satu perjalanan acyclovir dalam calitan 44% daripada pesakit dengan sel-sel yang sihat dikesan dalam 31% daripada kes-kes yang ditanda sel yang dijangkiti individu dan 25% pesakit mempunyai 10% sel yang dijangkiti.

Kandungan sel yang terinfeksi dalam smear (reaksi PIF) pesakit dengan herpes genital, dirawat dengan acyclovir

Tempoh Penyakit	Peratus dalam smear
	Sel yang dijangkiti					sel biasa
	Lebih daripada 75%	50-75%	40-50%	10%	Sel tunggal dalam n / sp
Turun semula (sebelum rawatan)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisi (selepas rawatan)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Menggunakan bertahun-tahun kumpulan wang bersama dan kaedah yang dot-penghibridan diperhatikan hampir 100% daripada perjanjian di antara hasil kajian itu. Ia harus diperhatikan bahawa untuk meningkatkan kebolehpercayaan diagnosis GH, terutamanya dalam kes-kes di mana terdapat subklinikal dan bentuk malomanifestnyh herpes, ia adalah disyorkan untuk menggunakan 2-3 kaedah diagnosis makmal, terutamanya apabila memeriksa wanita hamil, wanita yang mempunyai sejarah obstetrik yang kurang bernasib baik, orang yang mempunyai diagnosis sakit puan yang tidak dinyatakan.

Oleh itu, bagi PCR diagnosis jangkitan virus dan bakteria saluran urogenital adalah perlu untuk menilai hasil yang positif yang diperolehi dengan sejarah, kehadiran (atau ketiadaan) gejala klinikal tertentu. Jika klamidia dikesan dengan PCR, maka dalam hal ini adalah mungkin untuk membicarakan jangkitan dan menyelesaikan masalah terapi dengan sewajarnya. Dalam kes pengesanan mycoplasmas (ureaplasmas) adalah patogen oportunis, untuk mengesahkan diagnosis dikehendaki menjalankan budaya melanjutkan pelajaran, t. E. Bahan tanaman dari sensitif pesakit untuk kultur sel. Hanya apabila hasil positif diperolehi dalam analisis kebudayaan kita boleh bercakap mengenai pengesahan makmal tentang diagnosis mycoplasmosis. Kaedah yang sama akan membolehkan, jika perlu, untuk menentukan kepekaan mikcoplasma terpencil untuk bentuk ubat yang sering digunakan (antibiotik, fluoroquinolones, dan lain-lain).

Mungkin jangkitan satu peringkat dengan beberapa virus keluarga Nepresviridae. Sering kali kita mengesan jangkitan satu pesakit dengan HSV-1, HSV-2 dan virus CMV. Lebih kerap dijangkiti dengan beberapa virus herpes adalah pesakit dengan manifestasi klinikal dan makmal IDS menengah (pesakit dengan oncohematological, onkologi, dijangkiti HIV). Oleh itu, ditunjukkan bahawa gangguan klinikal dan imunologi yang sedang berkembang dalam jangkitan HIV disertai dengan peningkatan jumlah herpesvirus yang dikesan oleh kaedah hibridisasi molekul. Dalam prognostically paling penting ini boleh dianggap sebagai pengesanan tahap satu kompleks DNA jenis HSV-1, CMV dan HHV-6.

[1], [2], [3]