Vitamin A dalam darah

Nilai rujukan (norma) kepekatan vitamin A (retinol) dalam serum darah: pada kanak-kanak 1-6 tahun - 0.7-1.5 μmol / l, 7-12 tahun - 0.91-1.71 μmol / l, 13 -19 tahun - 0,91-2,51 μmol / l; pada orang dewasa ia adalah 1.05-2.09 μmol / l.

Vitamin A adalah berkaitan dengan liposoluble dan wujud dalam dua bentuk - vitamin A yang sebenar atau retinol (hanya terdapat dalam produk haiwan) dan pro-vitamin A, yang dikenali sebagai karotena (disediakan daripada haiwan atau asal sayur-sayuran), yang boleh ditukar kepada retinol pada dinding saluran penghadaman. Kira-kira 50-90% daripada retinol makanan yang diterima dan diserap di dalam usus kecil dan diangkut dalam chylomicrons berkaitan dengan kompleks ke hati, di mana ia disimpan dalam bentuk retinol palmitate. Sekiranya perlu, ia dilepaskan ke dalam aliran darah dalam bentuk retinol, yang digabungkan dengan protein pengikat vitamin A. Dalam serum, protein A-mengikat protein + kompleks retinol mengikat kepada transthyretin. Dari serum, retinol ditangkap oleh sel sasaran, seperti photoreceptors retinal dan epitel.

Apabila vitamin A memasuki badan yang melebihi keperluan (180-430 μg retinol sehari bergantung kepada umur, jantina dan keadaan fisiologi), lebihannya disimpan di hati membentuk depot vitamin ini. Dengan pengambilan retinol yang berkurang daripada makanan, kedai hati dibebaskan ke dalam aliran darah, mengekalkan kepekatan retinol serum pada paras normal (di atas 0.7 μmol / L). Bentuk vitamin A (retina dan asid retinoik) aktif secara biologi lain terdapat dalam darah dalam kepekatan yang sangat rendah (di bawah 0.35 μmol / L); pada ester retinol kira-kira 5% daripada jumlah vitamin A (0.1-0.1 μmol / l).

Vitamin A mempunyai peranan penting dalam proses pengurangan pengoksidaan. Retinol menggalakkan pembentukan glikogen dalam hati dan otot, menggalakkan peningkatan kolesterol dalam darah, mengambil bahagian dalam sintesis steroid dan hormon seks. Ia diperlukan untuk pertumbuhan dan pembentukan tulang rangka resynthesis rhodopsin, dan juga menyumbang kepada fungsi normal membran mukus dan epitelium perlindungan kulit, mencegah metaplasia itu, hyperkeratosis dan penyelumuran berlebihan. Vitamin A membantu menguatkan rambut, gigi dan gusi. Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, ia menunjukkan peranan pelbagai vitamin A dalam pencegahan kanser dan peraturan imuniti (penting untuk menyiapkan fagositosis, meningkatkan sintesis Ig, merangsang pengeluaran pembunuh sel-sel T, merangsang jenis T-helper II et al.). Vitamin A - antioksidan aktif, terutamanya bertindak di hadapan vitamin E; ia melindungi vitamin C daripada pengoksidaan. Kekurangan vitamin A dianggap sebagai faktor risiko bagi neoplasma malignan. Dalam kajian eksperimen, menunjukkan bahawa peningkatan dalam kandungan vitamin A dalam diet meningkatkan jangka median hidup sebanyak 17.5%. Zink adalah penyumbang penting metabolisme vitamin A (diperlukan untuk sintesis protein A-mengikat vitamin).

Keperluan harian purata untuk retinol untuk orang dewasa (20-50 tahun) ialah 1.2 mg (4000 IU, 1 IU bersamaan dengan retinol 0.3 μg), untuk wanita hamil - 1.5 mg (5000 IU), untuk menyusu - 1, 8 mg (6000 IU), untuk orang lebih 60 tahun - 2.5 mg (10,000 IU). Sekurang-kurangnya satu pertiga daripada keperluan retinol harian hendaklah diserahkan kepada badan dalam bentuk siap; Selebihnya dapat diserap oleh penggunaan karotenoid, yang mana retinol membentuk dalam tubuh. Perlu diingat bahawa kira-kira 30% retinol dalam makanan dimusnahkan oleh rawatan haba mereka. Aktiviti retinol adalah 2 kali lebih tinggi daripada karotena, di samping itu, yang terakhir hanya 30-40% diserap ke dalam usus. Oleh itu, dalam menilai pengambilan makanan, dianggap sebagai 1 mg retinol kira-kira sesuai dengan 6 mg karotenoid.

Penentuan retinol (vitamin A) dan karotenoid dalam serum mengikut Bessey dalam pengubahsuaian LA Anisimova

Prinsip kaedah ini

Penentuan vitamin A dan karotenoid didasarkan pada hidrolisis mereka dalam larutan alkohol alkali, diikuti dengan pengekstrakan dengan campuran pelarut organik.

Reagen

• Larutan 11 M kalium hidroksida (KOH).
• 96% etil alkohol.
• 1 M larutan kalium hidroksida (KOH) dalam 96% etil alkohol: 1 jisim penyelesaian 11 M KOH dicampurkan dengan 10 jilid alkohol 96%. Reagen disediakan pada hari kajian. Jika pewarnaan berlaku semasa pencampuran, alkohol mesti dibersihkan dengan penyulingan sebelum digunakan.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Campuran xilena-oktana: disediakan dengan mencampurkan jumlah xilena dan oktana yang sama.

Siasatan dijalankan pada spektrofotometer.

Kursus penentuan vitamin A

Darah yang diambil dari jari (kira-kira 1 ml) ditambah kepada label centrifuge dan dimasukkan ke dalam cawan kaca dengan air suam (suhu 40-45 ° C) selama 20-30 minit. Untuk memisahkan serum, darah beku dengan teliti luka di sekitar pinggir tiub dengan batang kaca nipis dan disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 minit.

Pilih 0.12 ml serum dan pindahkan ke tiub aglutinasi, kemudian tambah 0.12 ml larutan kalium hidroksida alkohol 1 M. Isinya digegarkan dengan teliti.

Tiub ujian dengan kuar diletakkan di dalam tab mandi air selama 20 minit pada suhu 60 ° C untuk hidrolisis.

Sampel disejukkan dan 0.12 ml campuran xylena-oktana ditambah kepada mereka, digegarkan dengan kuat selama 10-15 saat. Hebat sekali lagi dan centrifuge.

Berhati-hati mengeluarkan lapisan atas yang mengandungi vitamin A dan karotenoid dengan pipet Pasteur dengan getah get dan memindahkannya ke microcuvettes.

Sampel adalah spektrofotometri pada panjang gelombang 328 nm - untuk menentukan vitamin A, dan pada panjang gelombang 460 nm - untuk menentukan karotenoid.

Selepas spektrofotometri sampel yang dikaji adalah tertakluk kepada sinaran ultraungu untuk kemusnahan vitamin A. Bagi tujuan ini, pada jarak 15-20 cm dari (bakteria) lampu microcuvettes kuarza ditetapkan supaya penyinaran yang terdedah bahagian cuvette, dipenuhi dengan cecair; Masa penyinaran adalah 45-60 minit.

Sampelnya berulang kali spectrophotometric pada panjang gelombang 328 nm. Kandungan vitamin A ditentukan dari perbezaan nilai kepupusan (ketumpatan optik), dengan mengambil kira pekali (faktor) 637, dikira oleh Bessey untuk vitamin A.

Pengiraan dilakukan mengikut formula:

X = 637 × (E328 (1) - E328 (2)),

Di mana X ialah kandungan vitamin A, μg / dL; 637 adalah pekali yang dikira oleh Bessey untuk penentuan vitamin A; E328 (1) - kepadatan optik penyelesaian sebelum penyinaran; E328 (2) adalah ketumpatan optik penyelesaian selepas penyinaran.

Koefisien untuk memindahkan kepekatan vitamin A dari μg / dL dalam μmol / l ialah 0.035.

Kandungan karotenoid dikira dengan formula:

X = 480-E480,

Di mana X ialah kandungan karotenoid, μg / dL; 480 adalah pekali yang dikira oleh Bessey untuk menentukan karotenoid; E480 adalah kepadatan optik penyelesaian ujian.

Nota:

Menurut Bessey, jumlah serum yang lebih besar atau lebih kecil dapat diambil selama penelitian, namun nisbahnya terhadap volume larutan alkohol harus tetap dengan perubahan dalam volume (jumlah) dari campuran xilena-oktana.

Norma dalam kandungan vitamin A dalam serum darah adalah: pada bayi baru lahir dan bayi - 160-270 μg / l; pada orang dewasa, 1.05-2.45 μmol / l (300-700 μg / l). Kandungan karotenoid dalam serum dewasa adalah 800-2300 μg / l.