Karyotyping

Untuk kajian kromosom, kultur darah jangka pendek sering digunakan, serta sel sumsum tulang dan budaya fibroblast. Darah yang dihantar ke makmal dengan antikoagulan tertumpu kepada sentrifugasi untuk pemendakan sel darah merah, dan leukosit diinkubasi dalam medium kultur selama 2-3 hari. Phytohemagglutinin ditambah kepada sampel darah, kerana ia mempercepatkan aglutinasi eritrosit dan merangsang pembahagian limfosit. Fasa yang paling sesuai untuk mengkaji kromosom adalah metaphase mitosis, jadi colchicine digunakan untuk menghentikan pembahagian limfosit pada peringkat ini. Menambah ubat ini kepada budaya membawa kepada peningkatan dalam bahagian sel yang berada dalam metafase, iaitu, pada peringkat kitaran sel, apabila kromosom paling baik dilihat. Setiap replika kromosom (menghasilkan salinannya sendiri) dan selepas pewarnaan yang sesuai dapat dilihat dalam bentuk dua kromatid yang dilekatkan pada centromere atau penyempitan pusat. Sel-sel kemudian dirawat dengan larutan natrium klorida hipotonik, tetap dan berwarna.

Untuk kromosom pencelupan, pewarna Romanovsky-Giemsa, 2% acetaminomine atau 2% acetazarine lebih kerap digunakan. Mereka mengotorkan kromosom sepenuhnya, secara seragam (kaedah rutin) dan boleh digunakan untuk mengenal pasti anomali berangka kromosom manusia.

Untuk mendapatkan gambaran terperinci tentang struktur kromosom, pengenalan (pengenalpastian) kromosom individu atau segmen mereka, pelbagai kaedah pewarnaan pembezaan digunakan. Kaedah yang paling biasa digunakan adalah Giemsa, serta G- dan Q-lentur. Pemeriksaan mikroskopik dadah sepanjang panjang kromosom mendedahkan satu siri bernoda (heterochromatin) dan band tidak berwarna (euchromatin). Watak pengusiran melintang yang diperolehi dalam kes ini membolehkan untuk mengenal pasti setiap kromosom dalam set, kerana selanjar jalur dan saiznya adalah tegas dan tetap bagi setiap pasangan.

Plat metafasa sel individu diambil gambar. Kromosom individu dipotong daripada gambar-gambar dan disisipkan pada helaian kertas supaya; gambaran seperti kromosom dipanggil karyotype.

Penggunaan pewarnaan tambahan, serta kaedah baru untuk mendapatkan persediaan kromosom, yang membolehkan panjang kromosom regangan, meningkatkan ketepatan diagnostik sitogenetik.

Tatanama khas telah dibangunkan untuk menggambarkan karyotype manusia. Karyotype biasa seorang lelaki dan seorang wanita ditetapkan sebagai 46, XY dan 46, XX, masing-masing. Dalam sindrom Down, dicirikan oleh kehadiran kromosom tambahan 21 (trisomy 21), karyotype wanita digambarkan sebagai 47, XX 21+, dan lelaki - 47, XY, 21+. Dengan kehadiran anomali struktur kromosom, perlu menunjukkan lengan panjang atau pendek yang diubah: huruf p menandakan lengan pendek, lengan panjang, dan translocation. Oleh itu, apabila lengan pendek kromosom 5 (sindrom "kucing menjerit") dipadam, karyotype wanita digambarkan sebagai 46, XX, 5p-. Ibu seorang kanak-kanak yang mengalami pemindahan sindrom Down - pembawa translocation seimbang 14/21 mempunyai karyotype 45, XX, t (14q; 21q). Kromosom translocation dibentuk apabila lengan panjang kromosom 14 dan 21 bergabung, bahu pendek hilang.

Setiap bahu dibahagikan kepada daerah, dan mereka pula menjadi segmen, dan mereka dan orang lain ditetapkan oleh angka Arab. Centromere kromosom adalah titik permulaan untuk mengira rantau dan segmen.

Oleh itu, empat penanda digunakan untuk topografi kromosom: nombor kromosom, simbol bahu, nombor kawasan dan nombor segmen dalam kawasan tertentu. Sebagai contoh, 6p21.3 rekod bermakna bahawa kita bercakap kira-kira pasangan-6 kromosom, lengan pendek, kawasan 21, segmen 3. Terdapat watak-watak lebih pilihan, dalam pter tertentu - hujung lengan pendek, qter - hujung lengan panjang.

Kaedah penyelidikan cytogenetic membolehkan untuk mengesan penghapusan dan perubahan lain dalam kromosom hanya dalam saiz kira-kira 1 juta pangkalan (nukleotida).

[1], [2], [3], [4]