Karyotaip

Kultur darah jangka pendek, sel sumsum tulang, dan kultur fibroblas paling kerap digunakan untuk mengkaji kromosom. Darah dengan antikoagulan yang dihantar ke makmal disentrifugasi untuk mengendapkan eritrosit, dan leukosit diinkubasi dalam medium kultur selama 2-3 hari. Phytohemagglutinin ditambah kepada sampel darah, kerana ia mempercepatkan aglutinasi eritrosit dan merangsang pembahagian limfosit. Fasa yang paling sesuai untuk mengkaji kromosom ialah metafasa mitosis, jadi colchicine digunakan untuk menghentikan pembahagian limfosit pada peringkat ini. Menambah ubat ini ke dalam kultur membawa kepada peningkatan dalam bahagian sel dalam metafasa, iaitu, pada peringkat kitaran sel apabila kromosom paling kelihatan. Setiap kromosom mereplikasi (menghasilkan salinannya sendiri) dan, selepas pewarnaan yang sesuai, kelihatan sebagai dua kromatid yang dilekatkan pada sentromer, atau penyempitan pusat. Sel-sel tersebut kemudiannya dirawat dengan larutan natrium klorida hipotonik, tetap, dan diwarnakan.

Untuk kromosom pewarna, pewarna Romanovsky-Giemsa, 2% acetcarmine atau 2% acetarsein paling kerap digunakan. Mereka mewarna kromosom sepenuhnya, sama rata (kaedah rutin) dan boleh digunakan untuk mengesan anomali berangka kromosom manusia.

Untuk mendapatkan gambaran terperinci tentang struktur kromosom, kenal pasti (takrifkan) kromosom individu atau segmennya, pelbagai kaedah pewarnaan pembezaan digunakan. Kaedah yang paling biasa digunakan ialah Giemsa, serta G- dan Q-banding. Apabila memeriksa mikroskop penyediaan sepanjang kromosom, beberapa jalur bernoda (heterochromatin) dan tidak bernoda (eukromatin) didedahkan. Sifat jaluran melintang yang diperolehi dengan cara ini membolehkan mengenal pasti setiap kromosom dalam set, kerana selang seli jalur dan saiznya adalah individu dan tetap untuk setiap pasangan.

Plat metafasa sel individu difoto. Kromosom individu dipotong daripada gambar dan ditampal mengikut susunan pada helaian kertas; gambar kromosom ini dipanggil karyotype.

Penggunaan pewarnaan tambahan, serta kaedah baru untuk mendapatkan persediaan kromosom yang membolehkan kromosom diregangkan panjang, dengan ketara meningkatkan ketepatan diagnostik sitogenetik.

Tatanama khas telah dibangunkan untuk menggambarkan karyotype manusia. Karyotype normal seorang lelaki dan seorang wanita ditetapkan sebagai 46, XY dan 46, XX, masing-masing. Dalam sindrom Down, dicirikan oleh kehadiran kromosom tambahan 21 (trisomi 21), karyotype wanita digambarkan sebagai 47, XX 21+, dan lelaki adalah 47, XY, 21+. Sekiranya terdapat anomali struktur kromosom, adalah perlu untuk menunjukkan lengan panjang atau pendek yang diubah: huruf p menandakan lengan pendek, q menandakan lengan panjang, dan t menandakan translokasi. Oleh itu, dalam kes pemadaman lengan pendek kromosom 5 (cri du chat syndrome), karyotype wanita digambarkan sebagai 46, XX, 5p-. Ibu kepada kanak-kanak dengan sindrom Down translokasi, pembawa translokasi seimbang 14/21, mempunyai karyotype 45, XX, t(14q; 21q). Kromosom translokasi dibentuk oleh gabungan lengan panjang kromosom 14 dan 21, dan lengan pendek hilang.

Setiap lengan dibahagikan kepada kawasan, yang seterusnya dibahagikan kepada segmen, kedua-duanya ditetapkan dengan angka Arab. Sentromer kromosom adalah titik permulaan untuk mengira kawasan dan segmen.

Oleh itu, empat label digunakan untuk topografi kromosom: nombor kromosom, simbol lengan, nombor rantau dan nombor segmen dalam rantau itu. Sebagai contoh, entri 6p21.3 bermaksud bahawa kita bercakap tentang kromosom 6 pasangan ke-6, lengan pendeknya, wilayah 21, segmen 3. Terdapat juga simbol tambahan, khususnya pter - hujung lengan pendek, qter - hujung lengan panjang.

Kaedah penyelidikan sitogenetik membenarkan pengesanan penghapusan dan perubahan lain dalam kromosom hanya kira-kira 1 juta bes (nukleotida) dalam saiz.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]