Sel stem hemopoietic darah tali pusat

Darah umbi umbi berfungsi sebagai sumber sel stem hematopoietik terhadap potensi proliferatif dan kemampuan repopulasi sel hematopoietik. Ia telah berulang kali menunjukkan bahawa, pada masa penghantaran, darah tali pusat mengandung sejumlah besar sel-sel progenitor hematopoietik yang kurang berkomitmen. Sesetengah penulis percaya bahawa kelebihan pemindahan stem hematopoietik sel darah tali adalah bahawa tidak perlu mencari penderma yang serasi dengan antigen HLA. Menurut mereka, ketidakmatangan sebab sistem imun bayi yang baru lahir menurun aktiviti fungsi sel immunocompetent dan, dengan itu, lebih rendah daripada dalam tulang sumsum pemindahan, insiden teruk reaksi "rasuah berbanding tuan rumah". Dalam survival sel pemindahan darah tali pusat tidak lebih rendah daripada sel-sel sum-sum tulang, walaupun dalam kes menggunakan nombor yang lebih kecil daripada GSK ditadbir setiap 1 kg berat badan pesakit. Walau bagaimanapun, pada pandangan kami, bilangan optimum soalan dipindahkan sel-sel darah tali pusat perlu bagi engraftment berkesan dalam tubuh penerima, keserasian imunologi mereka, dan beberapa lain-lain aspek pemindahan sel stem hematopoietic tali pusat darah memerlukan analisis yang lebih serius.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Mendapatkan sel stem hematopoietik darah tali pusat

Prosedur untuk mendapatkan sel stem hematopoietic darah tali pusat memerlukan pengambilan dengan segera selepas kelahiran dan pengasingannya daripada plasenta, apabila plasenta berada di utero atau bekas utero, serta seksyen Caesarean, tetapi juga bekas utero. Telah ditunjukkan bahawa dalam kes pengurangan masa dari kelahiran hingga pemisahan bayi yang baru lahir dari plasenta hingga 30 saat, jumlah darah kord yang diperoleh meningkat rata-rata sebanyak 25-40 ml. Dengan prosedur kemudian, jumlah darah yang sama hilang. Adalah ditubuhkan bahawa pemisahan awal kanak-kanak dari afterburn tidak melibatkan apa-apa akibat negatif untuk bayi baru lahir.

Rusia Institut Penyelidikan Hematologi dan Pemindahan Darah membangunkan teknologi yang berkesan dan kos rendah untuk kedua-dua darah tali pada keturunan fisiologi ((70.2 + 25.8) ml) dan seksyen cesarean ((73.4 + 25.1) ml). Satu kaedah untuk pemisahan darah tali pusat dengan hasil yang cukup tinggi sel mononuklear dan ternukleus - (83.1 + 9.6) dan (83.4 + 14.1)%, masing-masing. Cara yang lebih baik untuk krioawetan darah tali pusat, yang memastikan keselamatan yang tinggi sel mononuklear dan CFU-GM - (96,8 + 5,7) dan (89.6 + 22.6)%, masing-masing. Kecekapan kaedah persampelan darah tali saliran menggunakan bekas "Kompoplast-300" (Rusia) yang. Pagar penulis darah tali dilakukan segera selepas kelahiran dan pengasingannya daripada plasenta, dari segi meletakkan plasenta dalam rahim atau bekas utero. Sebelum tusukan urat tali pusat pusat bayi apabila dirawat dengan 5% berwarna iodin, dan kemudian dua kali - 70% etil alkohol. Darah mengalir melalui tiub penghubung ke wadah secara spontan. Tempoh pagar tidak melebihi 10 minit. 66 dikumpulkan kaedah isi padu saliran sampel darah pusat purata (72 + 28) ml, dan bilangan leukosit dalam sampel purata penuh - (1.1 + 0.6) x x 107. Analisis darah tali pusat untuk kemandulan (pencemaran bakteria, HIV-1 virus hepatitis B dan C, sifilis, dan jangkitan cytomegalovirus) dalam hanya satu sampel telah dikenal pasti IgG-antibodi untuk hepatitis C. Dalam kajian yang lain apabila plasenta selepas kelahiran permukaan janin telah diletakkan dalam bingkai khas downwardly, kord telah dirawat dengan 5% natrium iodin dan 75% etil alkohol th. Pembuluh-pembuluh korda telah dikeringkan dengan jarum dari sistem transfusi (G16). Darah itu disalirkan ke dalam bekas secara spontan. Jumlah darah diambil dengan cara ini purata (55 + 25) ml. Kertas G. Kogler et al (1996) Kord darah mengambil jalan tertutup dan diperolehi dalam jumlah yang besar darah - secara purata (79 + 26) ml. Penulis ambil perhatian bahawa di antara 574 kord sampel darah mengandungi kira-kira 7% kurang daripada 40 ml darah, yang tidak membenarkan untuk menggunakan mereka untuk pemindahan. K. Isoyama et al (1996), dengan mengambil darah tali oleh exfusion aktif menggunakan picagari, menerima purata 69.1 ml darah (kord jumlah darah diubah 15-135 ml). Akhir sekali, A. Abdel-Mageed PI rakan usaha sama (1997) dengan punovinnoy urat catheterization diperolehi dalam purata 94 ml saraf darah (56-143 ml).

Untuk mengurangkan risiko jangkitan iatrogenic dan pencemaran oleh rembesan ibu dibangunkan koleksi sistem darah tertutup berdasarkan sistem transfuzioinoy digunakan secara meluas Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (Amerika Syarikat), yang mengandungi 62.5 ml CPDA (citrate-fosfat-dextrose dengan adenina) sebagai antikoagulan. Teknologi untuk menghasilkan bahan adalah amat penting untuk penyediaan sampel kualiti berbanding dengan jumlah kandungan dan ketulenan penggantungan sel. Satu kaedah yang sedia ada dalam koleksi darah tali pusat, kotoryeuslovno dikelaskan kepada ditutup, semi-terbuka dan terbuka sistem sleduetotdavat keutamaan pertama, seperti dalam sistem tertutup ketara mengurangkan risiko pencemaran mikrob bahan, serta pencemaran penggantungan sel sel ibu.

A. Nagler dan penulis bersama (1998) menjalankan analisis perbandingan keberkesanan sistem persampelan darah kord tiga. Dalam varian pertama, prosedur itu dilakukan dalam sistem yang tertutup oleh exfusion darah terus ke dalam bekas. Dalam varian kedua, darah tali diperolehi melalui kaedah penyemburan darah aktif jarum suntik1 dengan membasuh lebih lanjut urat plasenta dan saliran darah serentak ke dalam bekas (kaedah terbuka). Dalam varian ketiga, darah itu ditarik balik dalam sistem separa terbuka dengan secara aktif mengeluarkannya dengan jarum suntik dan mencuci melalui arteri kord pusing dengan eksfusi serentak ke dalam bekas. Dalam versi pertama, penulis menerima darah tali pusat pada volume (76.4 + 32.1) ml dengan jumlah leukosit (10.5 + 3.6) x 10 ⁶ setiap 1 ml darah. Dalam varian kedua, indeks yang sepadan ialah (174.4 + 42.8) ml dan (8.8 + 3.4) x 10 ⁶ / ml; dalam ketiga - (173.7 + 41.3) ml dan (9.3 + 3.8) x 10 ⁶ / ml. Jangkitan yang paling kerap berlaku pada sampel darah tali pusat ketika menggunakan sistem terbuka. Hubungan langsung antara jisim plasenta dan jumlah darah yang diekstrak telah ditubuhkan - dengan peningkatan plasenta massa, jumlah darah yang dikumpul meningkat.

Selepas pensampelan darah tali pusat, langkah pemisahan berikut-pengasingan sel mononuklear dan pemurnian penggantungan sel daripada eritrosit. Di dalam keadaan kajian dinukleuskan sel diasingkan oleh mereka pemendapan eritrosit methylcellulose lysis dengan ammonium klorida. Walau bagaimanapun, untuk tujuan klinikal, methylcellulose tidak boleh digunakan, kerana kehilangan sel stem hematopoietik mencapai 50-90%. Melintang sel-sel darah merah yang berkaitan dengan jumlah yang besar penyelesaian yang bekerja di klinik juga tidak dijalankan, walaupun peratusan pemisahan dengan cara ini dinukleuskan sel-sel dengan fenotip CD34 +, dan sel-sel leluhur fungsi CFU-GM dan CFU-GEMM jauh lebih tinggi. Agen baru untuk mengasingkan sel-sel mononuklear dalam larutan ketumpatan kepadatan pembeli kecerunan (BDS72) telah dilaporkan. Bahan ini mempunyai parameter fisiologi berikut: pH - 7.4, osmolality - 280 mosm / kg, ketumpatan - 1.0720 g / ml. Menurut penulis, dengan bantuannya adalah mungkin untuk mengisolasi 100% sel positif CD34 dan mengeluarkan 98% sel darah merah. Walau bagaimanapun, klinik ini belum lagi memohon BDS72.

Kaedah pemisahan diuji sel ternukleus daripada darah tali pusat biasanya digunakan penyelesaian HES 10% atau 3% larutan gelatin. Kecekapan pemendakan erythrocytes dan pengasingan sel-sel nukleus dalam kedua-dua kes adalah hampir sama. Walau bagaimanapun, dalam hal penggunaan sebagai sedimenting ejen gelatin mungkin untuk mendapatkan jumlah yang agak besar untuk CFU-GM, daripada apabila menggunakan HES. Ia adalah dianggap bahawa perbezaan dalam kecekapan pemulihan CFU-GM kelajuan yang tidak sama rata kerana pemendapan pecahan individu atau sel-sel keupayaan ternukleus molekul HES diserap pada hematopoietic reseptor permukaan sel dan dengan itu menghalang sensitiviti mereka ke tanah jajahan merangsang faktor, yang digunakan apabila pengkulturan CFU-GM in vitro. Walau bagaimanapun, kedua-dua sedimenter mungkin sesuai untuk mengasingkan sel-sel nukleus ketika membuat bank darah tali pusat pusat berskala besar.

Kaedah pemisahan dan cryopreservation darah tali pusat pada dasarnya tidak berbeza daripada yang digunakan dalam kerja dengan sel stem hematopoietik darah perifer dan sumsum tulang penderma dewasa. Tetapi apabila menyediakan sejumlah besar sampel darah tali pusat untuk banknya, kaedah pemisahan mestilah, pertama sekali, kos rendah. Oleh itu, sekarang, malangnya, untuk keperluan klinikal telah menggunakan kaedah rutin pemisahan dan cryopreservation sel darah tali pusat digunakan, dan kaedah yang lebih berkesan tetapi berkesan secara kewangan kekal banyak percubaan.

Kriteria penilaian keseluruhan ditubuhkan diri mereka hematopoietic keperluan jumlah sel dan kepada kajian sampel darah tali pusat untuk mengesan agen jangkitan. Untuk memastikan pemindahan sel-sel darah tali pusat hematopoietik, semua sampel darah mesti diperiksa terutamanya untuk jangkitan hematogenous dan penyakit genetik. Sesetengah penulis mengesyorkan kaedah khas tambahan kajian darah tali pusat untuk tujuan mendiagnosis penyakit genetik seperti talasemia dan sel sabit anemia, kekurangan Deaminase trifosfat, agammaglobulinemia Bruton, penyakit Harlera dan pemain profesional.

Menurut cadangan Ticheli L. Et al (1998), dalam setiap sampel darah tali pusat adalah perlu untuk menentukan bilangan sel ternukleus, sel-sel SB34-positif dan CFU-GM, membawa HLA-menaip untuk menentukan kumpulan darah ABO dan Rh keahliannya. Di samping itu, pembenihan dijalankan bakteriologi, ujian serologi untuk HIV dan jangkitan CMV, HBsAg, hepatitis C, HTLY-I dan HTLV-II (leukemia T-sel, manusia), sifilis, toxoplasmosis. Reaksi rantai polimerase terhadap cytomegalovirus dan jangkitan HIV adalah wajib.

Prosedur yang sangat baik untuk mendapatkan darah tali hendaklah dijalankan mengikut ketat dengan prinsip bioetika perubatan. Sebelum permulaan pengumpulan darah adalah perlu untuk mendapatkan persetujuan wanita hamil untuk pelaksanaannya. Temubual awal dengan seorang wanita hamil untuk mendapatkan persetujuan yang dimaklumkan untuk melakukan semua manipulasi, dari hasil pemeriksaan darah hingga selesai dokumentasi, dilakukan hanya oleh personil medis. Dalam mana-mana kes tidak boleh diterima melaksanakan mana-mana prosedur ini oleh kakitangan dengan biologi, kimia, farmaseutikal dan pendidikan bukan perubatan lain, memandangkan pelanggaran norma-norma ditubuhkan bioetika dan hak asasi manusia. Untuk ujian positif untuk pembawa HBsAg, antibodi kepada agen penyebab hepatitis C, HIV dan Sifilis darah tali pusat tidak diambil, dan sampel darah yang diambil sudah dibuang dan dimusnahkan. Perlu diingatkan bahawa membawa jangkitan terpendam dalam bayi yang baru lahir adalah lebih jarang daripada orang dewasa, oleh itu kebarangkalian pemindahan dan pembangunan komplikasi berjangkit campuran hematopoietic sel darah tali hematogenous adalah jauh lebih rendah daripada dalam kes pemindahan sum-sum tulang daripada penderma dewasa.

Satu perkara penting pemakaian darah tali di klinik adalah penilaian rasuah, yang berdasarkan kuantifikasi sel-sel stem hematopoietic dalam sampel sel darah tali pusat dan dos yang diperlukan untuk pemindahan. Piawaian bagi bilangan sel darah tali pusat yang optimum yang diperlukan untuk pemindahan masih belum dikembangkan. Tidak ada pandangan umum yang diterima walaupun pada parameter rutin seperti bilangan CD34-positif sel dan CFU-GM. Sesetengah penulis dinilai potensi sel hematopoietic oleh analisis budaya jangka panjang dengan penentuan kandungan unit tanah jajahan membentuk biasa untuk granulocytes, eritrosit, monosit dan megakaryocytes - CFU-GEMM.

Walau bagaimanapun, dalam tetapan klinikal, penilaian standard pemindahan darah kord biasanya merangkumi hanya penentuan jumlah sel nukleus atau mononuklear.

Penyimpanan sel stem hematopoietik darah tali pusat

Sesetengah masalah wujud dalam teknologi penyimpanan sel darah tali pusat hematopoietik. Apabila krioawetan sel-sel stem hematopoietic untuk mencapai mod pembekuan optimum mereka perlu mengurangkan jumlah darah tali pusat dan sel-sel darah merah sebelum ini dikeluarkan untuk mengelakkan hemolisis dan risiko reaksi ketidakserasian antigen eritrosit (ABO, Rh). Untuk tujuan ini, pelbagai kaedah untuk mengasingkan sel-sel nukleus adalah sesuai. Pada awal tahun 90-an abad lalu kaedah yang paling banyak digunakan untuk memisahkan sel ternukleus dalam kecerunan ketumpatan berdasarkan Ficoll dengan ketumpatan 1.077 g / ml, atau serapan dengan kepadatan 1,080 g / ml. Pemisahan saraf darah dengan kecerunan ketumpatan membolehkan untuk memilih sel terutamanya mononuklear tetapi membawa kepada kerugian besar sel-sel leluhur hematopoietic - sehingga 30-50%.

Kecekapan pemendapan kanji hidroksietil dalam proses pengasingan sel darah tali pusat adalah dianggarkan dengan cara yang berbeza. Sesetengah penulis menunjukkan kualiti pemisahan yang rendah dengan menggunakan kaedah ini, sementara penyelidik lain, sebaliknya, di antara semua kaedah yang mungkin lebih suka memperuntukkan darah tali pusat HSC dengan tepat menggunakan penyelesaian 6% kanji hidroksietil. Ini menekankan kecekapan tinggi pemendapan sel hemopoietik, yang menurut beberapa data, mencapai 84% hingga 90%.

Penyokong sudut pandangan yang lain berfikir bahawa hampir semua proses pemeringkatan melibatkan besar sel-sel kerugian yadrosoderzhashih dan menawarkan untuk membuat pemisahan oleh Centrifuging, memisahkan darah tali pusat kepada 3 pecahan: eritrosit, leukosit dan cincin plasma. Mengasingkan sel-sel dengan cara ini, pencipta mendapati bahawa kandungan sel-sel mononuklear sel leluhur hematopoietic awal dan sel-sel dengan CD34 + immunophenotype akhirnya adalah masing-masing 90, 88 dan 100% daripada tahap asal. Kuantiti yang sama pertumbuhan disucikan dalam kaedah ini sel-sel darah tali pusat yang diperoleh oleh penyelidik lain: selepas pemendapan dinukleuskan diperuntukkan 92%, 98% - mononuklear, 96% - sel CD34 positif dan 106% daripada unit tanah jajahan membentuk.

Pada akhir 1990-an, gelatin digunakan secara meluas sebagai ejen sedimen. Dalam amalan klinikal, menggunakan sel stem hematopoietik gelatin diasingkan daripada darah tali pusat sejak 1994. Apabila menggunakan larutan gelatin 3%, kecekapan pengasingan sel-sel nukleat mencapai 88-94%. Penggunaan meluas gelatin dalam mewujudkan bank darah tali pusat telah mengesahkan kelebihan ke atas lain-lain cara sedimen. Analisis perbandingan semua kaedah di atas pengasingan sel ternukleus dari segi penggunaan berurutan mereka dalam setiap sampel darah tali pusat ujian menunjukkan bahawa sel-sel mononuklear sedimenter keluar optimum dengan phenotype CD34 + / CD45 +, serta dengan jumlah CFU-GM dan CFU-GEMM adalah 3% larutan gelatin. Ia terbukti menjadi ketara kaedah yang kurang berkesan menggunakan Ficoll kepadatan kecerunan, dan penggunaan selulosa methyl dan hydroxyethyl kanji di mana kehilangan sel hematopoietic mencapai 60%.

Perkembangan jumlah pemindahan stem sel darah tali pusat dikaitkan bukan sahaja dengan perkembangan kaedah untuk pengeluaran mereka, tetapi juga penyimpanan. Terdapat banyak masalah yang secara langsung berkaitan dengan penyediaan darah tali pusat untuk penyimpanan jangka panjang dan pilihan teknologi cryopreservation optimum untuk sampelnya. Antaranya adalah isu-isu kesesuaian tatacara pemisahan, penggunaan pelbagai media cryopreserving, dan penggunaan kaedah untuk menyediakan sel-sel yang dicairkan untuk transplantasi. Pengangkutan contoh darah kord yang asli sering dilakukan dari kawasan yang jauh dari pusat hematologi. Sehubungan dengan ini, masalah timbul dari tempoh yang dibenarkan untuk penyimpanan darah tali pusat dari masa penerimaannya kepada permulaan cryopreservation, yang amat penting dalam pembangunan bank darah tali pusat.

Kajian aktiviti fungsi sel-sel darah tali hematopoietic selepas penyimpanan jangka panjang (sehingga 12 tahun) dalam nitrogen cecair mendedahkan bahawa kira-kira 95% daripada sel-sel hematopoietik pada masa ini tidak kehilangan kapasiti proliferatif yang tinggi. Kertas Yurasova S. Et al (1997) menunjukkan bahawa darah tali pusat yang disimpan pada suhu bilik (22 ° C) atau pada 4 ° C untuk 24 dan 48 jam tidak ketara mengurangkan daya maju sel-sel hematopoietic bahawa tahap awal adalah sesuai 92 dan 88%. Walau bagaimanapun, jika masa penyimpanan dilanjutkan hingga tiga hari, bilangan sel nukleus yang berdaya maju dalam darah tali pusat berkurangan. Pada masa yang sama, kajian lain mendapati bahawa semasa penyimpanan selama 2-3 hari pada suhu 22 ° C atau 4 terjejas terutamanya daya maju granulocytes matang, tetapi tidak sel haemopoietik.

Terhadap daya maju darah tali sel stem hematopoietic mungkin mempunyai kesan negatif daripada komponen sistem untuk koleksinya. Analisis kesan antikoagulan yang berbeza, yang mekanisme tindakan adalah disebabkan oleh mengikat ion kalsium (ACD, EDTA, XAPD-1) untuk sel-sel leluhur hematopoietic dalam keadaan penyimpanan darah tali 24 hingga 72 jam mendedahkan kesan negatif terhadap daya maju sel ternukleus. Dalam hal ini, penulis mengesyorkan penggunaan PBS (fosfat penyelesaian penampan) dengan tambahan heparin asli tanpa bahan pengawet pada kepekatan 20 U / ml, yang, pada pendapat mereka, membolehkan untuk meningkatkan tempoh simpanan unfractionated darah tali sehingga 72 jam dan menjimatkan aktiviti fungsi unit tanah jajahan membentuk. Walau bagaimanapun, dalam kajian pemuliharaan CFU-GM dan CFU-G menunjukkan bahawa darah tali masa penyimpanan pusat sebelum krioawetan tidak boleh melebihi sembilan jam. Jelas sekali, dalam kes ini harus bertindak prinsip bahawa jika terdapat data yang bercanggah perlu menggunakan kehidupan penyimpanan darah tali minimum yang dicadangkan dan memulakan sel-sel pembekuan diasingkan diprogramkan secepat yang mungkin.

Apabila sel stem hematopoietik beku darah tali pusat, penyelesaian 10% DMSO biasanya digunakan sebagai cryoprotectant. Walau bagaimanapun, sebagai tambahan kepada kesan penyembuhan yang jelas, dimetilsulfoxide dalam kepekatan ini mempunyai kesan sitotoksik langsung, walaupun di bawah keadaan pendedahan yang minimum kepada sel pembentuk darah darah tali pusat. Untuk mengurangkan kesan sitotoksik DMSO, suhu pendedahan sifar, peningkatan dalam kelajuan semua manipulasi dan basuh berulang selepas pencairan sampel umbilical cord digunakan.

Institut Hematologi dan Transfusiologi Akademi Sains Perubatan dari Ukraine telah membangunkan arah saintifik sejak tahun 1995, yang bertujuan untuk mengkaji darah tali pusat sebagai sumber alternatif sel hemopoietic batang. Khususnya, teknologi baru untuk cryopreservation suhu rendah sel-sel hemopoietic darah kord tidak terkawal dan telah dikembangkan. Sebagai cryoprotectant, polyvinylpyrolidone perubatan berat molekul rendah digunakan. Kaedah kriopreservation darah kord tak terbakar adalah berdasarkan teknologi asal penyediaan sel-sel untuk pembekuan dan teknik rawatan khas penggantungan sel sebaik sebelum pemindahan.

Salah satu faktor terpenting yang mempengaruhi tahap aktiviti fungsi sel stem hemopoietic cryopreserved adalah kadar penggantungan suspensi sel, terutama semasa fasa penghabluran. Pendekatan perisian untuk menyelesaikan masalah kelajuan dan masa pembekuan menyediakan peluang yang baik untuk membuat kaedah cryopreservation yang mudah dan sangat berkesan, tanpa membasuh penggantungan sel daripada cryoprotectants sebelum pemindahan.

Tahap pembekuan dan pencairan segera adalah paling berbahaya bagi daya maju sel semasa penyediaannya. Apabila membekukan sel-sel hemopoietik, sebahagian besarnya boleh dimusnahkan pada masa peralihan medium intercellular dari cecair ke fasa padat - penghabluran. Untuk mengurangkan peratusan kematian sel, cryoprotectants digunakan, mekanisme tindakan dan keberkesanan krioprotektif yang telah dibahas secukupnya dalam kesusasteraan saintifik.

A menjanjikan Teknik arah Pengoptimuman krioawetan sumsum tulang dan sel-sel darah tali pusat adalah untuk menggabungkan dalam penyelesaian yang sama kepada kepekatan yang rendah cryoprotectants dengan beberapa mekanisme yang berbeza tindakan, sebagai contoh, yang bertindak atas tahap intraselular DMSO dan hydroxyethyl kanji atau albumin memiliki kesan disertakan extracellular.

Untuk krioawetan sel-sel darah tali digunakan secara tradisional 20% penyelesaian DMSO yang kekal mekanikal kacau dalam mandi ais, perlahan-lahan dicurahkan ke dalam penggantungan sel untuk mencapai yang sama (1: 1) Nisbah jumlah penggantungan sel dan cryoprotectant itu. Kepekatan terakhir dimetil sulfoksida ialah 10%. Suspensi sel kemudian disejukkan pada cryostat perisian dengan kelajuan HS / min hingga -40 ° C, selepas itu kadar penyejukan meningkat hingga 10 ° C / min. Selepas mencapai -100 ° C, bekas dengan penggantungan sel diletakkan di dalam nitrogen cecair (-196 ° C). Dengan kaedah cryopreservation ini, keselamatan sel-sel mononuklear yang berfungsi secara aktif selepas pencairan mencapai 85% dari peringkat awal.

Teknik pengubahsuaian krioawetan bertujuan mengurangkan kepekatan DMSO dengan menambah kanji hydroxyethyl (kepekatan akhir sebanyak DMSO dan hydroxyethyl kanji adalah, masing-masing, 5 dan 6%). Kecekapan tinggi kombinasi cryoprotectants ini diperhatikan apabila penggantungan sel-sel mieloid beku, dengan tidak kurang cytoprotection berbanding dengan larutan 10% dimetilsulfoksida. Bilangan sel nukleus yang berdaya maju mencapai 96.7% daripada tahap asas, dan aktiviti fungsinya, dianggarkan dengan jumlah CFU-GM, adalah 81.8%.

Apabila menggunakan penyelesaian sulfoxide dimetil pada kepekatan antara 5 hingga 10% dalam kombinasi dengan 4% hydroxyethyl kanji (kepekatan akhir) mendapati bahawa pemeliharaan sel CD34 positif dalam julat ini dimethylsulfoxide boleh dikatakan tidak berubah. Pada masa yang sama dalam keadaan mengurangkan kepekatan DMSO 5-2,5% diperhatikan kematian jisim sel-sel darah tali - bilangan unit sel yang berdaya maju dikurangkan 85,4-12,2%. Penulis lain juga membuat kesimpulan bahawa ia adalah 5 dan 10% penyelesaian dimetil sulfoxide (dalam penjelmaan hak cipta - dalam kombinasi dengan serum autologous) dengan kecekapan maksimum menyediakan cytoprotection semasa krioawetan HSC darah tali pusat. Di samping itu, berurutan keselamatan yang tinggi beku dan sel dicairkan ditandakan dalam kes gabungan 5 atau 10% DMSO 4% penyelesaian hydroxyethyl kanji, terutamanya pada kadar penyejukan yang terkawal TOS / min. Dalam satu lagi kertas yang digunakan penyelesaian cryoprotective terdiri daripada tiga bahan sudah - DMSO, albumin manusia yang tulen dan RPMI sederhana dalam nisbah 1: 4: 5, yang telah ditambah kepada penggantungan sel sehingga satu nisbah jumlah yang sama (akhir kepekatan DMSO adalah 5%). Selepas pembelahan dalam mandi air pada suhu + 4 ° C, keselamatan CFU-GM melebihi 94%.

Sesetengah penulis mencadangkan menggunakan darah tali pusat yang tak terbakar untuk cryopreservation, kerana sel-sel hematopoietik yang banyak hilang semasa penghapusan sel darah merah. Dalam penjelmaan ini, larutan 10% dimethylsulfoxide digunakan untuk melindungi sel-sel mononuklear daripada kesan kerosakan cryocrystallization. Pembekuan dilakukan pada kadar penyejukan HS / min hingga -80 ° C, dan selepas itu penggantungan sel darah tali pusat ditenggelamkan dalam nitrogen cair. Dengan kaedah pembekuan ini, lisis sebahagian daripada erythrocytes berlaku, oleh itu sampel darah tidak memerlukan fraksionasi. Selepas pencairan, penggantungan sel dibasuh dari hemoglobin bebas dan dimetilsulfoksida dalam larutan albumin manusia atau dalam serum autologous pesakit dan digunakan untuk pemindahan.

Pemeliharaan sel-sel leluhur hematopoietic selepas dinyahfros darah tali unfractionated memang lebih tinggi daripada berperingkat, tetapi berkaitan dengan krioustoychivostyu sel-sel darah merah boleh menyebabkan masalah yang serius akibat daripada pasca pemindahan Pemindahan sel-sel merah ABO-tidak serasi. Di samping itu, jumlah darah yang tidak tercemar disimpan dengan ketara meningkat. Dari sudut klinikal pandangan, lebih-lebih lagi sebaik-baiknya krioawetan sebelum ini diasingkan dan suci dari pecahan sel yang lain sel hematopoietic darah tali pusat.

Khususnya, kaedah adalah krioawetan sel-sel darah tali berperingkat membolehkan mengeluarkan eritrosit dalam persediaan untuk pembekuan, yang menggunakan penyelesaian 6% daripada hydroxyethyl kanji dalam penyelesaian komposisi plazmozameshchath "Stabizol". Selepas pencairan, penggantungan sel yang diperolehi sedia untuk kegunaan klinikal tanpa manipulasi tambahan.

Oleh itu, pada masa ini, terdapat banyak cara yang berkesan untuk menyembuhkan kanser darah tali pusat. Perbedaan utama adalah bahwa sampel darah dibekukan tidak terbakar atau tertakluk pada pemisahan menjadi pecahan sel selama tahap persiapan dan menuai sel-sel nukleat tanpa campuran eritrosit.

Pemindahan sel stem hemopoietic darah tali pusat

Pada akhir 80-an - awal 90-an abad yang lalu didapati bahawa darah tali pusat yang membekalkan janin semasa kehamilan dicirikan oleh kandungan tinggi sel stem hematopoietik. Kesederhanaan relatif untuk mendapatkan sel-sel darah tali pusat dan ketiadaan masalah etika yang jelas mempromosikan penggunaan sel stem darah tali dalam perubatan praktikal. Transplantasi darah kord yang pertama kepada anak dengan anemia Fanconi berkhidmat sebagai titik permulaan untuk memperluaskan pemindahan stem sel stem darah dan mewujudkan sistem untuk peruntukan banknya. Di dalam sistem global bank darah tali pusat, yang terbesar ialah Pusat New York untuk Darah Plasenta, yang berada di neraca Institut Kesihatan Nasional. Jumlah sampel darah kord yang disimpan di bank ini menghampiri 20 LLC. Bilangan penerima (terutamanya kanak-kanak) juga semakin meningkat, dan pemindahan yang berjaya telah dijalankan. Menurut Jabatan Kesihatan Amerika Syarikat, tempoh kelahiran berulang-ulang bagi penerima darah kord HSC telah melebihi 10 tahun.

Ini tidak menghairankan, kerana banyak kajian potensi hematopoietic darah tali pusat telah menunjukkan bahawa kuantiti dan kualiti sel-sel stem terawal bukan sahaja tidak kalah dengan seorang dewasa manusia sum-sum tulang, tetapi juga oleh beberapa langkah melebihi ia. A berpotensi proliferatif lebih tinggi sel stem darah tali pusat disebabkan ciri-sel isyarat pembangunan, kehadiran reseptor pada HSCs faktor pertumbuhan tertentu, keupayaan sel-sel darah tali pusat untuk autocrine pengeluaran faktor-faktor pertumbuhan, saiz besar dan panjang telomeres.

Oleh itu, ciri-ciri genomik dan fenotip sel-sel stem hematopoietic kord mentakdirkan darah berkualiti engraftment tinggi potensi pemulihan penderma hematopoietic dalam penerima.

Kelebihan sel stem hematopoietik darah tali pusat

Antara faedah sebenar menggunakan kord hematopoietic sel-sel stem darah untuk pemindahan lebih sumber-sumber lain sel hematopoietic ia harus diperhatikan hampir sifar risiko kepada kesihatan penderma (jika tidak dianggap sedemikian plasenta a), dan mengurangkan keperluan anestesia am. Penggunaan pusat pemindahan sel darah tali mengembang disebabkan sebahagiannya oleh sistem rasuah HLA riba (ketidakserasian dari satu hingga tiga antigen). Teknik penyimpanan jangka panjang sel-sel darah tali hematopoietic dalam keadaan beku, yang meningkatkan kebarangkalian mendapat jarang HLA-jenis dan mengurangkan masa carian HLA-dipadankan pemindahan allogeneic. Pada masa yang sama, risiko membangunkan beberapa jangkitan laten yang dihantar oleh laluan penghantaran berkurangan. Di samping itu, ada bentuk insurans hayat biologikal yang murah berhubung dengan kemungkinan menggunakan sel darah kord untuk transplantasi autologous.

Walau bagaimanapun, kerana jumlah kecil darah yang boleh diambil dari uri (purata tidak lebih daripada 100 ml) ke hadapan masalah mendapatkan jumlah maksimum yang mungkin darah dari tali urat pusat dalam pematuhan ketat dengan syarat-syarat risiko minimum pencemaran bakteria pusat darah tali sampel diperolehi.

Sel hematopoietic primitif daripada darah tali pusat umumnya dikenal pasti oleh kehadiran di CD34 permukaan glikofosfoproteina mereka, dan atas dasar sifat-sifat kerja mereka dengan memeriksa assay atau tanah jajahan pembentukan clonogenic in vitro. Analisis perbandingan menunjukkan bahawa dalam darah tali pusat dan sumsum tulang kandungan maksimum sel mononuklear CD34 positif dalam pecahan masing-masing 1.6 dan 5.0%, tahap maksimum unit pembentukan koloni dalam subpopulation daripada CD34 + cells - 80 dan 25%, jumlah kecekapan pengklonan CD34 + -cells - 88 dan 58%, tanah jajahan maksimum membentuk sel-sel yang berpotensi proliferatif tinggi (HPP-CFC dalam -populyatsii CD34 +) - 50 dan 6.5%. Ia perlu ditambah bahawa kecekapan pengklonan daripada CD34 + CD38-sel dan keupayaan untuk bertindak balas terhadap rangsangan cytokine juga lebih tinggi dalam sel-sel stem hematopoietic darah tali pusat.

Kombinasi antigen fenotip Thy-1, CD34 dan CD45RA mengesahkan kapasiti tinggi proliferatif sel hematopoietic darah tali pusat, dan ungkapan daripada tiga antigen pada permukaan sel-sel darah tali menunjukkan bahawa mereka tergolong dalam sel batang. Di samping itu, telah ditetapkan bahawa darah tali mengandungi sel dengan CD34 + fenotip yang tidak mempunyai penanda perbezaan linear. Tahap dalam darah korda subpopulations sel dengan profil fenotip CD34 + / Lin adalah kira-kira 1% daripada jumlah CD34-positif sel. Sel-sel leluhur hematopoietik menimbulkan darah tali sebagai garisan sel limfoid, dan beberapa linear pluripotent pembezaan sel mieloid, yang juga menunjukkan bahawa mereka tergolong kepada sel-sel stem.

Seperti yang telah disebutkan, perbezaan penting antara sumsum tulang dan darah tali pusat adalah dalam jumlah yang diperolehi oleh satu prosedur persampelan digunakan untuk pemindahan sel hematopoietic. Apabila sumsum tulang kehilangan pemindahan jisim sel dalam proses pemisahan, pembekuan, pencairan dan ujian adalah dibenarkan dalam lingkungan 40-50%, sel-sel darah tali kerugian adalah sangat penting, kerana apabila menggunakan nombor yang tidak mencukupi HSC pemindahan mungkin tidak dapat dipertahankan. Menurut G. Kogler et al (1998), untuk pemindahan sel dalam berat badan penerima 10 kg potensi pemindahan (jumlah bilangan sampel darah tali dikumpul - 2098) mungkin semua sampel darah tali, berat badan 35 kg - 67%, dan hanya 25% daripada sampel akan menyediakan pemindahan berkesan dalam pesakit yang mempunyai berat badan 50-70 kg. Keadaan klinikal ini menunjukkan keperluan untuk mengoptimumkan dan meningkatkan keberkesanan kaedah persampelan yang sedia ada, pembiakan dan penyimpanan sel-sel darah tali pusat. Oleh itu, isu-isu penyeragaman kaedah persampelan, ujian, pemisahan dan krioawetan darah tali kini secara meluas dibincangkan dalam literatur untuk penubuhan bank darah, penggunaannya dalam klinik, serta mewujudkan syarat-syarat dan syarat-syarat penyimpanan sel-sel stem hematopoietic darah tali pusat.

[7], [8], [9],

Penggunaan sel stem hematopoietik darah tali pusat dalam perubatan

Biasanya dari darah tali pusat boleh diasingkan sehingga 10 ⁶ sel hematopoietic batang, jarang yang lebih. Sehubungan dengan ini, sehingga hari ini, persoalannya masih ada kecukupan sel darah tali pusat hematopoietik untuk memulihkan hematopoiesis penerima dewasa. Pendapat mengenai isu ini dibahagikan. Beberapa penyelidik percaya bahawa jumlah ini adalah mencukupi untuk kanak-kanak pemindahan, tetapi terlalu kecil untuk pemindahan manusia dewasa, yang mana pentadbiran yang optimum (7-10) × 10 ⁶ sel CD34 positif setiap 1 kg berat badan - purata 7 × 10 ⁸ setiap pemindahan. Daripada pengiraan ini, satu sampel umbilical cord mengandungi 700 kali sel-sel stem hematopoietik yang diperlukan untuk satu pemindahan kepada pesakit dewasa. Bagaimanapun, penilaian kuantitatif seperti itu dibuat dengan analogi dengan jumlah sel yang ditransfusikan dalam sumsum tulang dan mengabaikan ciri ontogenetik hematopoiesis.

Khususnya, ia mengabaikan fakta kapasiti proliferatif yang lebih tinggi daripada sel-sel stem hematopoietic darah tali berbanding dengan sel-sel leluhur hematopoietic sumsum tulang. Hasil kajian potensi pembentukan koloni in vitro menunjukkan bahawa satu dos darah kord dapat menyediakan penyembuhan hematopoiesis penerima dewasa. Sebaliknya, kita tidak harus lupa bahawa bilangan HSCs berkurangan walaupun dalam proses perkembangan embrio: kandungan sel CD34 positif dalam darah tali pusat adalah linear dikurangkan 5 kali dalam tempoh 20 minggu (darah untuk kajian ini telah diperolehi dalam kes penamatan awal kehamilan) 40 minggu kehamilan (tempoh buruh fisiologi), disertai paralellno secara kekal meningkatkan penanda ungkapan cytodifferentiation linear.

Oleh kerana kekurangan pendekatan standard untuk kuantifikasi dalam sampel darah tali sel leluhur kontroversi dos optimum sel-sel stem hematopoietic darah pusat berterusan. Beberapa penyelidik percaya bahawa kerana pemilihan kriteria sampel darah tali pusat boleh digunakan bilangan sel ternukleus dan sel-sel mononuklear, mengira semula kepada berat badan penerima, iaitu, dos mereka. Sesetengah penulis percaya bahawa ambang kuantitatif minimum CD34 + sel, walaupun untuk melakukan pemindahan autologous HSC, ialah 2 x 10 ⁶ / kg. Peningkatan dos sel hematopoietic 5 × 10 ⁶ sel / kg (sejumlah 2.5) telah menyediakan yang lebih sesuai untuk awal tempoh selepas pemindahan, mengurangkan kejadian komplikasi berjangkit dan memendekkan tempoh terapi antibiotik pencegahan.

Menurut E. Gluckman et al (1998) dalam hematologi untuk pemindahan berjaya sel darah tali pusat adalah pengenalan sekurang-kurangnya 3.7 × 10 ⁷ sel ternukleus setiap berat badan 1 kg penerima. Dengan mengurangkan dos sel stem hematopoietic 1 × 10 ⁷ atau kurang sel ternukleus setiap berat badan 1 kg pesakit dan risiko kegagalan rasuah kenaikan kanser berulang darah secara mendadak. Perlu diakui bahawa bilangan minimum sel progenitor diperlukan untuk pemulihan segera hemopoiesis selepas GSG allotransplantation belum diketahui. Secara teori ini boleh dicapai dengan menggunakan satu sel tunggal, tetapi dalam klinikal tulang sumsum pemindahan pesat dan stabil engraftment dijamin pemindahan sekurang-kurangnya (1-3) × 10 ⁸ sel ternukleus setiap 1 kg berat badan pesakit.

Satu kajian terperinci baru untuk menentukan jumlah optimum HSC dalam oncohematology termasuk pemerhatian pesakit dari tiga kumpulan yang terisolasi bergantung pada kandungan CD34-positif sel dalam bahan transplantasi. Pesakit kumpulan pertama yang diterima (3-5) x 10 ⁶ sel / kg. Dos HSC pada pesakit kumpulan kedua ialah (5-10) x 10 ⁶ sel / kg, dan pesakit kumpulan ketiga menerima pemindahan lebih daripada 10 x 10 ⁶ CD34 + sel / kg. Keputusan terbaik diperhatikan dalam kumpulan penerima yang menerima pemindahan dengan jumlah sel positif CD34 bersamaan dengan (3-5) x 10 ⁶ / kg. Dengan peningkatan dos sel pemindahan di atas 5 × 10 ⁶ / kg, tiada faedah penting secara statistik dikenalpasti. HSCs kandungan itu sangat besar dalam pemindahan (> 10 x 10 x ⁶ / kg) dikaitkan dengan jumlah hujan yang reinfusion sisa sel-sel tumor, yang membawa kepada penyakit yang berulang penyakit. Tidak terdapat hubungan langsung antara jumlah sel-sel progenitor allogeneic yang dipindahkan dan perkembangan reaksi "graft versus host".

Pengalaman dunia terkumpul transplantasi darah tali pusat HSC mengesahkan potensi repopulation tinggi mereka. Kadar engraftment pemindahan kord darah berkorelasi dengan bilangan sel nukleus diperkenalkan. Hasil terbaik diperhatikan dengan pemindahan 3 × 10 ⁷ / kg, sedangkan untuk sumsum tulang ini adalah 2 × 10 ⁸ / kg. Mengikut data pusat koordinasi, pada akhir tahun 2000 1200 pemindahan sel-sel darah tali pusat dibuat di dunia, terutamanya dari saudara-saudara penderma (83%). Jelas, kord darah perlu dipertimbangkan sebagai alternatif kepada sumsum tulang untuk pemindahan kepada pesakit dengan hemoblastosis.

Walau bagaimanapun, neonatal sifat sumber Cordova tisu hematopoietik menggalakkan kerana kehadiran ciri-ciri fungsi GCW itu. Walau bagaimanapun, hanya pengalaman klinikal boleh memberi jawapan kepada persoalan kecukupan sampel darah tali pusat untuk penyusunan semula hematopoietic dewasa penerima dengan aplasia hematopoiesis. Pemindahan sel darah tali digunakan dalam rawatan pelbagai penyakit tumor dan bukan tumor alam semula jadi: leukemia dan sindrom myelodysplastic, non-Hodgkin limfoma, dan neuroblastoma, anemia aplastik, kongenital Fanconi anemia dan kipas Diamond Black, kekurangan melekat leukocyte, sindrom Barr, sindrom Gunther penyakit Harlera, talasemia .

Penutupan perhatian dan penyelidikan yang berasingan patut mendapatkan aspek imunologi pemindahan sel pembentuk darah darah tali pusat. Ia menunjukkan bahawa dalam hal pemindahan sel stem darah tali pusat daripada penderma dengan keputusan pemindahan HLA-dipadankan tidak lengkap adalah agak memuaskan, bahawa, menurut penulis, menunjukkan darah tali immunoreactivity yang lebih rendah daripada sum-sum tulang.

Satu kajian terperinci komposisi sel darah tali pusat menunjukkan ciri-ciri kedua-dua spektrum fenotip sel effector sistem imun dan aktiviti kerja mereka, yang membolehkan untuk mempertimbangkan darah tali sebagai sumber HSCs dengan risiko yang rendah reaksi "rasuah berbanding tuan rumah". Ciri-ciri tambahan ketidakmatangan fungsi sel-sel darah tali immunocompetent harus diperhatikan ketidakseimbangan pengeluaran cytokine dan penurunan sensitiviti kepada cytokines peraturan baru tindak balas imun. Penghambatan yang terhasil dari aktiviti limfosit sitotoksik dianggap sebagai faktor yang menyumbang kepada pembentukan toleransi imunologi kepada tisu hemopoietik yang dipindahkan. Dalam populasi limfosit darah tali pusat, yang bertentangan dengan darah dan sumsum tulang periferal daripada penderma dewasa, dikuasai aktif, sel-sel tidak matang dan sel-sel penindas. Ini menunjukkan kekurangan darah limfa T-limfosit yang dikurangkan kepada tindak balas imun. Ciri penting populasi monocytes sel darah tali pusat adalah kandungan rendah sel-sel penyajian antigen yang berfungsi secara lengkap dan aktif.

Dalam satu tangan, tahap yang rendah kematangan sel-sel effector sistem imun dalam bacaan darah tali meliputi penggunaannya di klinik, kerana ciri-ciri ini membolehkan pengurangan keamatan konflik imun di antara sel-sel penderma dan penerima. Tetapi, di sisi lain, kita tahu tentang kewujudan hubungan antara tahap reaksi "rasuah berbanding penyakit tuan rumah" dan kesan antitumor pemindahan, iaitu, kesan pembangunan "rasuah-lawan-leukemia". Sehubungan dengan ini, satu kajian dilakukan terhadap sitotoksisitas antitumoral sel darah tali pusat. Keputusan menunjukkan bahawa, walaupun tindak balas imun yang benar-benar lemah sel darah tali pusat kepada rangsangan antigen, diaktifkan di tempat pertama adalah sel-sel pembunuh semulajadi dan sel-sel killeropodobnymi yang terlibat secara aktif dalam mekanisme pelaksanaan cytotoxicity anti-tumor. Selain itu, dalam sub-populasi limfosit darah tali pusat ditemui dengan phenotype CD16 + CD56 + dan CD16 "TCRa / p +. Ia adalah dianggap bahawa sel-sel ini dalam bentuk yang diaktifkan melaksanakan reaksi" rasuah-lawan-leukemia ".

Di Institut Onkologi, Akademi Sains Perubatan Ukraine sel hematopoietic dikrioawet daripada darah tali pusat telah diberikan kepada pesakit kanser dengan hypoplasia berterusan hematopoiesis kerana kemoterapi dan radioterapi. Pesakit-pesakit ini, pemindahan sel stem hematopoietic darah tali berkesan dipulihkan penindasan darah, seperti yang dibuktikan oleh ketinggian berterusan elemen membentuk matang dalam darah periferal, serta peningkatan dalam petunjuk mencirikan keadaan imuniti selular dan humoral. Kestabilan repopulyatsionnogo kesan selepas pemindahan sel darah tali hematopoietic membolehkan radiasi berterusan dan kemoterapi, tanpa mengganggu rawatan. Terdapat bukti kecekapan allograft pesakit kanser darah tali sel stem: risiko tahunan berulangnya tumor dalam penggunaannya adalah 25% berbanding 40% pada pesakit dengan allogeneic gen sumsum tulang dipindahkan.

Mekanisme tindakan sel stem darah tali dikrioawet boleh dianggap sebagai hasil daripada rangsangan humoral penerima hematopoiesis disebabkan oleh keupayaan unik sel neonatal untuk autocrine pengeluaran faktor-faktor pertumbuhan hematopoietic, serta akibat daripada engraftment sementara sel penderma (sebagai pengesahan - peningkatan yang ketara dalam kandungan darah periferi hemoglobin janin penerima 7-15 hari ke selepas pemindahan berbanding garis dasar). Ketiadaan dalam penerima reaksi selepas pemindahan darah tali - hasil toleransi relatif sel-sel imun, serta kriteria keyakinan kegunaan bahan biologi dikrioawet.

Sel-sel leluhur T limfosit pembunuh darah tali mampu pengaktifan di bawah pengaruh rangsangan cytokine luaran yang digunakan untuk membangunkan kaedah vivo baru ex vivo dan in mendorong anti-tumor sel sitotoksik limfoid untuk berikutnya pemindahan imunoterapi. Di samping itu, "ketidakmatangan" genom darah pusat sel imun membolehkan penggunaannya untuk meningkatkan aktiviti antitumor oleh pemodelan molekul.

Hari ini, darah tali pusat telah menemui aplikasi yang luas terutamanya dalam hematologi pediatrik. Pada kanak-kanak dengan allotransplantation leukemia akut sel stem hematopoietic darah tali berbanding allografts sumsum tulang, dengan ketara mengurangkan kadar reaksi "rasuah berbanding tuan rumah". Walau bagaimanapun, adalah diperhatikan dalam tempoh masa yang panjang neutropenia dan trombositopenia, dan malangnya, tahap yang lebih tinggi daripada 100 hari kematian selepas pemindahan. A tempoh yang lebih lama pemulihan dalam granulocytes darah periferi dan platelet mungkin disebabkan oleh perbezaan yang tidak mencukupi sub-populasi individu sel positif CD34 darah tali pusat, seperti yang dibuktikan oleh tahap yang rendah penyerapan rhodamine radioaktif dan ungkapan rendah antigen CD38 di permukaannya.

Pada masa yang sama, pemindahan sel stem hematopoietic darah pusat pesakit dewasa, yang dilakukan kerana kekurangan kedua-dua yang tidak berkaitan sumsum tulang penderma yang serasi, serta peluang untuk menggerakkan autologous HSC menunjukkan survival berulang-percuma tahunan yang tinggi pada pesakit yang berumur di bawah 30 tahun (73%) . Pengembangan lingkungan umur penerima (18-46 tahun) menurun survival 53%.

Analisis kuantitatif sel dengan phenotype CD34 + sumsum tulang dan saraf darah menunjukkan lebih tinggi (3.5 kali) kandungan mereka dalam sum-sum tulang, tetapi darah tali pusat menunjukkan penguasaan banyak sel dengan profil fenotip CD34 + HLA-DR .Izvestno, penanda chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + HLA-DR berkembang lebih aktif daripada sel-sel dengan immunophenotype CD34 + HLA-DR +, seperti yang disahkan dalam kajian eksperimen pertumbuhan budaya jangka panjang sel hematopoietic in vitro. Leluhur sel primitif dengan phenotype CD34 + CD38 yang terkandung dalam darah tali pusat dan sum-sum tulang, tetapi sel-sel darah tali pusat dengan penanda yang ditetapkan CD34 + CD38 mempunyai aktiviti clonogenic lebih tinggi daripada sel-sel hematopoietic fenotip yang sama, diasingkan daripada dewasa sumsum penderma tulang. Di samping itu, sel-sel darah tali pusat dengan CD34 + CD38 immunophenotype akan berkembang sebagai tindak balas kepada rangsangan dengan cytokines (IL-3, IL-6, G-CSF) dan membiak 7 kali lebih jajahan dalam budaya jangka panjang daripada sel-sel sum-sum tulang.

Bank sel stem darah tali pusat

Untuk pembangunan yang betul di padang baru perubatan praktikal - pemindahan sel stem darah tali pusat, dan juga untuk menjalankan pemindahan sel stem sumsum tulang hematopoietic, anda mesti mempunyai rangkaian luas bank darah, yang telah ditubuhkan di Amerika Syarikat dan Eropah. Jaringan intra-negeri bank darah tali bersatu oleh Persatuan Bank-Bank Bersih. Kemungkinan mewujudkan sebuah persatuan antarabangsa bank darah tali pusat ini telah dipilih oleh fakta bahawa untuk melaksanakan transplantations tidak berkaitan memerlukan sejumlah besar sampel darah tali pusat ditaip, yang membolehkan untuk memilih penderma HLA-sama ini. Hanya penubuhan sistem bank dengan penyimpanan sampel darah jenis HLA yang berlainan di dalamnya dapat benar-benar menyelesaikan masalah mencari penderma yang diperlukan. Organisasi seperti bank darah tali pusat memerlukan pembangunan awal norma etika dan undang-undang, yang sedang dibincangkan di peringkat antarabangsa.

Untuk mewujudkan bank darah tali pinggang di Ukraine, perlu membuat beberapa peruntukan dan dokumen.

Pertama sekali, ini adalah soal penyeragaman kaedah-kaedah pensampelan, fraksionasi dan pembekuan darah tali pusat. Ia perlu untuk mengawal selia peraturan-peraturan untuk darah pensampelan di hospital-hospital bersalin mengikut keperluan etika perubatan, untuk menentukan jumlah minimum darah tali yang memastikan pemindahan yang berjaya. Ia perlu dibandingkan dan penyeragaman kriteria yang berbeza daripada penilaian kualiti dan bilangan sel-sel leluhur hematopoietic serta kaedah HLA-menaip dan kaedah diagnosis penyakit genetik dan berjangkit yang boleh dihantar oleh penyerapan sel-sel darah tali pusat menetapkan kriteria pemilihan umum penderma yang sihat. Ia juga bernilai membincangkan penciptaan kemudahan penyimpanan berasingan untuk serum, sel dan DNA yang diperoleh daripada darah tali pusat.

Adalah mutlak diperlukan untuk mengatur rangkaian data komputer pada darah tali pusat untuk pelaksanaan hubungan dengan daftar penyumbang sumsum tulang. Untuk memajukan lagi transplantologi sel, protokol khas untuk membandingkan hasil darah tali pusat dan pemindahan tulang sumsum dari saudara-saudara HLA-identik dan penderma yang tidak berkaitan perlu dibangunkan. Dalam menangani masalah etika dan undang-undang penggunaan klinikal sel-sel darah tali pusat boleh membantu piawaian dokumentasi, termasuk persetujuan dimaklumkan mengenai ibu bapa, serta notis ibu atau saudara-mara kanak-kanak itu yang dikenal pasti oleh genetik dan / atau penyakit berjangkit.

Keadaan menentukan untuk pembangunan pemindahan sel di Ukraine akan menerima pakai Program Negara untuk menderma sel stem dan pembangunan kerjasama antarabangsa dengan negara-negara lain melalui Persatuan Dunia sumsum penderma tulang (WMDA), program sumsum penderma tulang Kebangsaan Amerika Syarikat (NMDP) dan daftar-daftar yang lain.

Generalisasi sejarah masih kekurangan hematopoietik pemindahan sel stem darah tali pusat, kita perhatikan bahawa andaian pertama kemungkinan aplikasi klinikal darah tali pusat, yang dibuat pada awal tahun 70-an, yang disahkan dalam tempoh 80 tahun hasil kajian eksperimen pada haiwan, dan pada tahun 1988 tahun telah dijalankan pemindahan pertama di dunia sel hematopoietic darah tali pusat manusia, dan kemudian mula untuk membangunkan satu rangkaian global bank darah tali pusat. Selepas 10 tahun, jumlah pesakit dengan sel-sel hematopoietic dipindahkan, pusat darah tali pusat lebih dekat kepada 800. Antaranya ialah pesakit dengan pelbagai penyakit tumor (leukemia, limfoma, tumor pepejal) dan bukan tumor (immunodeficiency kongenital, anemia, penyakit yang berkaitan dengan gangguan metabolik) alam semula jadi.

Dalam darah kord, kandungan awal dan komplot sel kombat adalah lebih tinggi daripada pada darah periferal orang dewasa. Dengan jumlah unit tanah jajahan membentuk granulocyte-macrophage dan potensi proliferatif mereka darah tali pusat adalah lebih besar daripada darah periferal orang dewasa, walaupun selepas pentadbiran faktor pertumbuhan. Dalam budaya sel jangka panjang in vitro, terdapat aktiviti proliferatif yang lebih besar dan daya maju sel darah tali pusat daripada sel sumsum tulang. Detik-detik kritikal dalam pemindahan sel stem darah tali pusat adalah bilangan dan ternukleus sel-sel yang berpotensi hematopoietic, kehadiran jangkitan cytomegalovirus, penderma HLA riba dan penerima, berat badan dan umur pesakit.

Walau bagaimanapun, pemindahan sel stem darah tali pusat boleh dianggap sebagai alternatif kepada pemindahan sumsum tulang untuk rawatan penyakit darah yang teruk, terutamanya kanak-kanak. Masalah klinikal pemindahan sel darah tali pusat secara beransur-ansur diselesaikan - ada teknik persampelan sudah agak cekap, pemisahan dan krioawetan sel-sel darah tali pusat, dengan syarat keadaan bagi pembentukan bank darah tali pusat, kaedah ujian adalah lebih baik sel ternukleus. Pemisahan optimum semasa sel-sel hematopoietic darah tali preform batang besar-besaran dalam penubuhan bank-bank perlu dianggap sebagai penyelesaian 3% daripada gelatin dan 6% penyelesaian hydroxyethyl kanji.

Perehrestenko P. Et al (2001) memang menunjukkan bahawa pemindahan saraf sel-sel stem darah perlu mengambil tempat yang sah dalam langkah-langkah terapeutik kompleks untuk mengatasi kemurungan hematopoiesis asal-usul pelbagai, kerana GSK darah tali berbeza dalam beberapa kelebihan yang ketara, antara yang penting ialah kemudahan relatif penuaian, tidak ada risiko kepada penderma, pencemaran rendah sel neonatal dengan virus dan kos yang rendah pemindahan. Beberapa penulis mencadangkan bahawa pemindahan sel darah tali pusat kurang kerap daripada sel-sel sum-sum tulang disertai dengan komplikasi yang berkaitan dengan reaksi "rasuah berbanding tuan rumah", yang adalah disebabkan, dalam pandangan mereka, ungkapan yang lemah dalam sel-sel darah tali antigen HLA-DR dan mereka belum matang. Walau bagaimanapun, penduduk utama sel ternukleus darah tali pusat adalah T-limfosit (sel SDZ-positif), yang kandungan adalah kira-kira 50%, iaitu 20% kurang daripada dalam darah periferal orang dewasa, tetapi perbezaan fenotip sub-populasi T-sel daripada ini sumber boleh diabaikan.

Antara faktor yang secara langsung memberi kesan kepada survival pemindahan sel stem darah tali pusat, kita harus mengambil perhatian umur pesakit (hasil yang terbaik dilihat dalam penerima berusia sehingga 5 tahun), diagnosis awal penyakit ini dan satu bentuk leukemia (kecekapan adalah lebih tinggi dalam leukemia akut). Yang penting ialah dos sel darah tali pusat nukleat, serta keserasian HLA mereka dengan penerima. Tidak ada analisis kemalangan keberkesanan klinikal pemindahan darah tali GSK dalam Onkologi dan Hematologi menunjukkan hasil yang terbaik rawatan menggunakan pemindahan berkaitan: satu tahun hidup bebas penyakit dalam kes ini mencapai 63%, manakala pemindahan yang tidak berkaitan - hanya 29%.

Oleh itu, kehadiran sejumlah besar sel-sel stem dalam darah tali pusat dan keupayaan repopulyatsionnaya tinggi neonatal sel-sel stem hematopoietic menjadikan mereka sesuai untuk pemindahan allogeneic pada pesakit dengan keganasan hematologi. Bagaimanapun, ambil perhatian bahawa rekapitulasi hematopoiesis selepas pemindahan sel stem hematopoietic darah tali "diregangkan dalam masa": memulihkan kandungan dalam neutrofil darah periferi biasanya berlaku pada akhir minggu ke-6, dan fenomena thrombocytopenia hilang, biasanya selepas 6 bulan. Di samping itu, sel-sel darah-membentuk yang tidak matang darah tali pusat tidak mengecualikan konflik imunologi: Kursus teruk akut dan kronik reaksi "rasuah berbanding tuan rumah" diperhatikan masing-masing pada 23 dan 25% daripada penerima. Berulang leukemia akut pada akhir tahun pertama selepas pemindahan sel darah tali pusat terdapat dalam 26% kes.

[10], [11]