Vitamin A dalam darah

Nilai rujukan (norma) untuk kepekatan vitamin A (retinol) dalam serum darah: pada kanak-kanak berumur 1-6 tahun - 0.7-1.5 μmol/l, 7-12 tahun - 0.91-1.71 μmol/l, 13-19 tahun - 0.91-2.51 μmol/l; pada orang dewasa - 1.05-2.09 μmol / l.

Vitamin A ialah vitamin larut lemak dan wujud dalam dua bentuk: vitamin A itu sendiri, atau retinol (hanya terdapat dalam produk haiwan), dan provitamin A, dikenali sebagai karotena (diperolehi daripada produk haiwan dan tumbuhan), yang boleh ditukar kepada retinol di dinding saluran penghadaman. Kira-kira 50-90% retinol pemakanan diserap dalam usus kecil dan diangkut dalam kompleks terikat kilomikron ke hati, di mana ia disimpan sebagai retinol palmitat. Apabila diperlukan, ia dilepaskan ke dalam aliran darah sebagai retinol kompleks dengan protein pengikat vitamin A. Dalam serum darah, protein pengikat vitamin A + kompleks retinol mengikat transthyretin. Dari serum darah, retinol diambil oleh sel sasaran, seperti fotoreseptor retina dan epitelium.

Apabila badan menerima vitamin A dalam kuantiti yang melebihi keperluan (180-430 mcg retinol setiap hari bergantung pada umur, jantina dan keadaan fisiologi), lebihannya disimpan di dalam hati, membentuk depot vitamin ini. Apabila pengambilan retinol dengan makanan dikurangkan, rizabnya dari hati dilepaskan ke dalam aliran darah, mengekalkan kepekatan retinol dalam serum darah pada paras normal (melebihi 0.7 μmol/l). Bentuk lain vitamin A yang aktif secara biologi (asid retina dan retinoik) terdapat dalam darah dalam kepekatan yang sangat rendah (di bawah 0.35 μmol/l); ester retinol menyumbang kira-kira 5% daripada jumlah vitamin A (0.1-0.17 μmol/l).

Vitamin A memainkan peranan penting dalam proses pengurangan pengoksidaan. Retinol menggalakkan pembentukan glikogen dalam hati dan otot, membantu meningkatkan kandungan kolesterol dalam darah, dan mengambil bahagian dalam sintesis hormon steroid dan seks. Ia diperlukan untuk pertumbuhan dan pembentukan sistem rangka, sintesis semula rhodopsin, dan juga menggalakkan fungsi normal membran mukus dan epitelium integumen kulit, mencegah metaplasia, hiperkeratosis, dan pengelupasan yang berlebihan. Vitamin A membantu menguatkan rambut, gigi dan gusi. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, peranan vitamin A yang pelbagai dalam mencegah kanser dan mengawal imuniti telah ditunjukkan (ia perlu untuk menyelesaikan fagositosis, meningkatkan sintesis Ig, merangsang pembentukan T-pembunuh, merangsang jenis II T-helpers, dll.). Vitamin A adalah antioksidan aktif, terutamanya bertindak dengan kehadiran vitamin E; ia melindungi vitamin C daripada pengoksidaan. Kekurangan vitamin A dianggap sebagai faktor risiko untuk neoplasma malignan. Kajian eksperimen menunjukkan bahawa meningkatkan kandungan vitamin A dalam diet meningkatkan jangka hayat median sebanyak 17.5%. Zink adalah kofaktor penting dalam metabolisme vitamin A (diperlukan untuk sintesis protein pengikat vitamin A).

Keperluan harian purata untuk retinol untuk orang dewasa (20-50 tahun) ialah 1.2 mg (4000 IU, 1 IU bersamaan dengan 0.3 mcg retinol), untuk wanita hamil - 1.5 mg (5000 IU), untuk wanita menyusu - 1.8 mg (6000 IU), untuk orang yang berumur lebih dari 6.000 mg (20.000 IU). Sekurang-kurangnya satu pertiga daripada keperluan harian untuk retinol hendaklah dibekalkan kepada badan dalam bentuk siap; selebihnya boleh dilindungi dengan mengambil karotenoid, dari mana retinol terbentuk di dalam badan. Perlu diambil kira bahawa kira-kira 30% retinol dalam produk makanan dimusnahkan semasa rawatan haba. Aktiviti retinol adalah 2 kali lebih tinggi daripada karotena, di samping itu, hanya 30-40% daripada yang terakhir diserap dalam usus. Oleh itu, apabila menilai diet, dipercayai bahawa 1 mg retinol adalah lebih kurang bersamaan dengan 6 mg karotenoid.

Penentuan retinol (vitamin A) dan karotenoid dalam serum darah mengikut Bessey seperti yang diubah suai oleh LA Anisimova

Prinsip kaedah

Penentuan vitamin A dan karotenoid adalah berdasarkan hidrolisis mereka dalam larutan alkohol beralkali diikuti dengan pengekstrakan dengan campuran pelarut organik.

Reagen

• 11 M larutan kalium hidroksida (KOH).
• 96% etil alkohol.
• 1 M larutan kalium hidroksida (KOH) dalam 96% etil alkohol: 1 isipadu larutan 11 M KOH dicampur dengan 10 isipadu etil alkohol 96%. Reagen disediakan pada hari kajian. Jika pewarnaan berlaku semasa mencampurkan, alkohol hendaklah ditulenkan dengan penyulingan sebelum digunakan.
• Xylene, tulen secara kimia
• Oktana, tulen secara kimia
• Campuran xylene-octane: disediakan dengan mencampurkan isipadu xilena dan oktana yang sama.

Kajian dijalankan menggunakan spektrofotometer.

Proses penentuan vitamin A

Darah yang diambil dari jari (kira-kira 1 ml) diletakkan dalam tiub emparan dan diletakkan dalam cawan kaca dengan air suam (suhu 40-45° C) selama 20-30 minit. Untuk memisahkan serum, bekuan darah ditarik dengan teliti di sekeliling tepi dinding tiub dengan batang kaca nipis dan disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 minit.

0.12 ml serum dikumpul dan dipindahkan ke tiub aglutinasi, di mana 0.12 ml larutan alkohol kalium hidroksida 1 M kemudiannya ditambah. Isinya digoncang sebati.

Tabung uji dengan sampel diletakkan di dalam tab mandi air selama 20 minit pada suhu 60° C untuk menjalankan hidrolisis.

Sampel disejukkan dan 0.12 ml campuran xylene-octane ditambah kepada mereka, dan mereka digoncang kuat selama 10-15 s. Mereka disejukkan semula dan disentrifugasi.

Lapisan atas yang mengandungi vitamin A dan karotenoid dikeluarkan dengan teliti menggunakan pipet Pasteur dengan mentol getah dan dipindahkan ke dalam mikrokuvet.

Sampel dispektrofotometer pada panjang gelombang 328 nm untuk menentukan vitamin A, dan pada panjang gelombang 460 nm untuk menentukan karotenoid.

Selepas spektrofotometri, sampel didedahkan kepada sinaran ultraungu untuk memusnahkan vitamin A. Untuk tujuan ini, lampu kuarza (bakteria) dipasang pada jarak 15-20 cm dari mikrokuvet supaya bahagian kuvet yang diisi dengan cecair terdedah kepada sinaran; masa penyinaran ialah 45-60 min.

Sampel dispektrofotometer semula pada panjang gelombang 328 nm. Kandungan vitamin A ditentukan oleh perbezaan nilai kepupusan (ketumpatan optik) dengan mengambil kira pekali (faktor) 637 yang dikira oleh Bessey untuk vitamin A.

Pengiraan dilakukan mengikut formula:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Di mana X ialah kandungan vitamin A, μg/dl; 637 ialah pekali yang dikira oleh Bessey untuk menentukan vitamin A; E328(1) ialah ketumpatan optik larutan sebelum penyinaran; E328(2) ialah ketumpatan optik larutan selepas penyinaran.

Pekali untuk menukar kepekatan vitamin A daripada µg/dL kepada µmol/L ialah 0.035.

Kandungan karotenoid dikira menggunakan formula:

X = 480-E480,

Di mana X ialah kandungan karotenoid, μg/dl; 480 ialah pekali yang dikira oleh Bessey untuk menentukan karotenoid; E480 ialah ketumpatan optik penyelesaian ujian.

Nota

Menurut Bessey, jumlah serum yang lebih besar atau lebih kecil boleh digunakan semasa menjalankan penyelidikan, tetapi nisbahnya kepada isipadu larutan alkohol mestilah malar dengan sebarang perubahan dalam isipadu (kuantiti) campuran xylene-octane.

Kandungan normal vitamin A dalam serum darah ialah: pada bayi baru lahir dan bayi - 160-270 μg/l; pada orang dewasa - 1.05-2.45 μmol/l (300-700 μg/l). Kandungan karotenoid dalam serum darah orang dewasa ialah 800-2300 μg/l.