Pakar perubatan artikel itu
Penerbitan baru
PCR sebagai kaedah untuk mendiagnosis penyakit genetik
Ulasan terakhir: 23.04.2024
Semua kandungan iLive disemak secara perubatan atau fakta diperiksa untuk memastikan ketepatan faktual sebanyak mungkin.
Kami mempunyai garis panduan sumber yang ketat dan hanya memautkan ke tapak media yang bereputasi, institusi penyelidikan akademik dan, apabila mungkin, dikaji semula kajian secara medis. Perhatikan bahawa nombor dalam kurungan ([1], [2], dan lain-lain) boleh diklik pautan ke kajian ini.
Jika anda merasakan bahawa mana-mana kandungan kami tidak tepat, ketinggalan zaman, atau tidak dipersoalkan, sila pilih dan tekan Ctrl + Enter.
PCR merupakan pencapaian baru dalam genetik molekul, yang digunakan untuk penguatan DNA dan membenarkan bahagian DNA tertentu (iaitu, gen genetik) dapat direplikasi secara cepat dalam vitro lebih daripada 200,000 kali. Untuk melaksanakan tindak balas, cukup untuk mempunyai bahan DNA satu sel; jumlah DNA yang diperkuatkan oleh PCR adalah begitu besar sehingga DNA ini hanya dapat ditenun (menggunakan kuar radioaktif selepas elektroforesis tidak diperlukan). Prasyarat untuk menjalankan PCR adalah pengetahuan tentang urutan nukleotida rantau DNA yang diperkuatkan untuk pemilihan primitif sintetik buatan.
Pada masa ini, PCR adalah satu proses yang berlaku dalam tiub tunggal dan terdiri daripada kitaran pengulang (duplikasi, menyalin) berulang urutan urutan molekul DNA untuk mendapatkan jumlah salinan yang cukup banyak yang dapat dikenalpasti oleh elektroforesis. Salah satu komponen utama tindak balas adalah "primers" - oligonukleotida sintetik yang terdiri daripada 20-30 pangkalan, pelengkap kepada "tapak" (bahagian) penyepuhlindiran (lampiran) di tapak identifikasi DNA template.
PCR meneruskan secara automatik dalam termostat termostat (thermocycler). Kitaran tiga langkah, hasil daripada salinan salinan DNA turutan yang tepat, diperoleh 30-50 kali berulang sesuai dengan program preset termokycler. Dalam kitaran pertama, oligopramer menghibridkan dengan DNA templat asal, dan kemudian (dalam kitaran berikutnya) dan dengan molekul DNA yang baru disintesis apabila ia terkumpul dalam campuran tindak balas. Dalam kes yang kedua, sintesis DNA tidak berakhir akibat perubahan dalam rejim suhu, tetapi apabila mencapai sempadan polimerase DNA rantau yang diperkuat, yang menentukan saiz rantau DNA yang disintesis dalam satu nukleotida.
Sebagai kaedah untuk mengesan molekul DNA yang diperoleh, elektroforesis digunakan, dengan cara yang bahan diperkuat dibahagikan mengikut ukuran amplicons (produk penguatan).
Dengan bantuan PCR, adalah mungkin untuk menyiasat secara langsung tapak penyetempatan mutasi yang disyaki atau tapak polimorfik, dan juga untuk mengkaji kehadiran mana-mana ciri khusus DNA lain.
[