Virus Hepatitis A

Hepatitis A virus adalah penyakit berjangkit manusia, dicirikan terutamanya oleh kerosakan hati dan secara klinikal ditunjukkan oleh mabuk dan jaundis. Virus hepatitis A ditemui pada tahun 1973 oleh S. Feinstone (et al.) menggunakan kaedah mikroskopi elektron imun dan dengan menjangkiti monyet - cimpanzi dan marmoset. Intipati kaedah mikroskopi elektron imun ialah antibodi spesifik (serum pemulihan) ditambah kepada penapisan najis pesakit dengan hepatitis A dan sedimen tertakluk kepada mikroskop elektron. Oleh kerana interaksi virus dengan antibodi tertentu, mereka mengalami pengagregatan tertentu. Dalam kes ini, mereka lebih mudah untuk dikesan, dan pengagregatan di bawah pengaruh antibodi mengesahkan kekhususan patogen. Penemuan S. Feinstone telah disahkan dalam eksperimen ke atas sukarelawan.

Virus hepatitis A adalah sfera, diameter virion ialah 27 nm. Genom diwakili oleh RNA positif untai tunggal dengan mm 2.6 MD. Tiada superkapsid. Jenis simetri ialah kubik - icosahedron. Kapsid mempunyai 32 kapsomer, ia dibentuk oleh empat polipeptida (VP1-VP4). Menurut sifatnya, virus hepatitis A tergolong dalam genus Heparnovirus, keluarga Picornaviridae. Dari segi antigen, virus hepatitis A (HAV - virus hepatitis A) adalah homogen. HAV membiak dengan baik dalam badan cimpanzi, babun, babun hamadryas dan monyet marmoset. Untuk masa yang lama, virus itu tidak dapat ditanam. Hanya pada tahun 1980-an adalah mungkin untuk mendapatkan kultur sel di mana HAV membiak. Pada mulanya, garisan sel berterusan bagi buah pinggang embrio rhesus macaque (kultur FRhK-4) digunakan untuk tujuan ini, dan kini barisan sel berterusan sel ginjal monyet hijau (kultur 4647) digunakan.

Menurut cadangan pakar WHO, tatanama penanda virus hepatitis A berikut telah diterima pakai: virus hepatitis A - antibodi HAV kepada virus hepatitis A: anti-HAV IgM dan anti-HAV IgG.

HAV ialah zarah kecil dengan diameter 27-30 nm, mempunyai simetri ikosahedral dan mempunyai kehomogenan. Elektronogram yang diperoleh menggunakan kaedah pengagregatan imun mendedahkan zarah padat elektron dengan kapsomer tersusun simetri dangkal. Dengan kontras negatif, kedua-dua zarah penuh dan kosong didedahkan dalam persediaan. Nukleokapsid HAV, tidak seperti influenza, tidak mempunyai tonjolan permukaan dan membran. Ia juga penting bahawa virion HAV tidak mempunyai struktur berbentuk jantung.

Berdasarkan sifat fizikokimianya, virus hepatitis A diklasifikasikan sebagai milik keluarga picornavirus, genus enterovirus dengan nombor siri 72. Walau bagaimanapun, taksonomi ini ternyata terlalu luar biasa, dan WHO menganggap mungkin untuk mengekalkan istilah "virus hepatitis A".

Seperti semua virus keluarga Picornaviridae, virus hepatitis A mengandungi asid ribonukleik. Beberapa makmal telah menunjukkan kemungkinan pengklonan genom virus hepatitis A, yang membuka prospek untuk mendapatkan vaksin.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Rintangan virus Hepatitis A

Virus ini agak tahan terhadap suhu tinggi, asid, pelarut lemak (tiada lipid), pembasmi kuman, dan bertolak ansur dengan suhu rendah dengan baik. Semua ini menyumbang kepada pemeliharaan jangka panjangnya dalam persekitaran luaran. Pada suhu bilik, ia bertahan selama beberapa minggu, pada 60 °C ia sebahagiannya kehilangan kejangkitannya selepas 4-12 jam, dan sepenuhnya - selepas beberapa minit pada 85 °C. Ia sangat tahan terhadap klorin, kerana ia mampu menembusi air paip melalui halangan kemudahan rawatan air.

Merumuskan semua data, kita boleh mencirikan virus hepatitis A seperti berikut:

• tuan rumah semula jadi ialah manusia;
• haiwan eksperimen - marmoset, cimpanzi;
• sumber jangkitan adalah najis;
• penyakit ini adalah wabak dan endemik;
• laluan penghantaran: feco-oral;
• tempoh inkubasi - 14-40 hari;
• peralihan kepada hepatitis kronik - tidak diperhatikan.

Sifat imunologi HAV adalah seperti berikut:

• Strain prototaip - Ms-1, CR-326, GВG. Kesemuanya serupa atau serupa dari segi imunologi;
• Antibodi - IgM dan IgG, dihasilkan sebagai tindak balas kepada pengenalan protein struktur virus dan pelindung;
• I. Kesan perlindungan gamma globulin serum manusia - menghalang atau melemahkan penyakit jika diberikan sebelum jangkitan atau semasa tempoh inkubasi.

Ciri-ciri fizikokimia NAU adalah seperti berikut:

• Morfologi: zarah sfera tanpa cangkang dengan simetri padu, kapsid terdiri daripada 32 kapsomer;
• Diameter - 27-30 nm;
• Ketumpatan dalam CsCl (g/cm3) - 1.38-1.46 (zarah terbuka), 1.33-1.34 (virion matang), 1.29-1.31 (virion tidak matang, zarah kosong);
• Pekali pemendapan - 156-160 virion matang;
• Asid nukleik ialah RNA beruntai tunggal, linear;
• Berat molekul relatif - 2.25 106-2.8 106KD;
• Bilangan nukleotida ialah 6,500-8,100.

Kestabilan HAV di bawah pengaruh fizikal dan kimia adalah seperti berikut:

• Kloroform, eter - stabil;
• Klorin, 0.5-1.5 mg/l, 5 °C, 15 min - penyahaktifan separa;
• Kloramina, 1 g/l, 20 °C, 15 min - tidak aktif sepenuhnya;
• Formalin, 1:4000, 35-37 °C, 72 h - penyahaktifan lengkap, 1:350, 20 °C, 60 min - penyahaktifan separa.

Suhu:

• 20-70 °C - stabil;
• 56 °C, 30 min - stabil;
• 60 °C, 12 jam - penyahaktifan separa;
• 85 °C, 1 min - tidak aktif sepenuhnya;
• Autoklaf, 120 °C. 20 min - tidak aktif sepenuhnya;
• Haba kering, 180 °C, 1 jam - tidak aktif sepenuhnya;
• UFO, 1.1 W, 1 min - tidak aktif sepenuhnya.

Data yang dibentangkan menunjukkan bahawa dalam sifat fizikokimianya, virus hepatitis A paling hampir dengan enterovirus. Seperti enterovirus lain, HAV tahan terhadap banyak larutan disinfektan dan tidak aktif sepenuhnya dalam beberapa minit pada suhu 85 °C dan autoklaf.

Telah terbukti bahawa virus hepatitis A boleh membiak dalam barisan monolayer primer dan berterusan kultur sel manusia dan monyet. Pembiakan aktif terutamanya virus hepatitis A dalam kultur in vitro diperhatikan apabila menggunakan ekstrak hati daripada monyet yang sakit sebagai bahan permulaan. Walau bagaimanapun, perlu diingatkan bahawa dalam semua eksperimen mengenai pembiakan virus hepatitis A pada kultur in vitro, perhatian diberikan kepada tempoh inkubasi yang panjang semasa laluan primer (sehingga 4-10 minggu), seterusnya pengumpulan bahan genetik virus meningkat, tetapi nilai mutlak kekal sangat tidak ketara, yang memberi alasan kepada ramai penyelidik virus hepatitis A untuk bercakap tentang replikasi virus hepatitis A dalam tisu.

Merumuskan data kesusasteraan tentang pembiakan virus hepatitis A dalam kultur tisu tambahan, boleh dikatakan bahawa fakta kelangsungan hidup jangka panjang HAV in vitro adalah tidak diragukan lagi. Keadaan optimum untuk tahap tinggi replikasi virus yang stabil belum dikenal pasti, dan ini menghalang kajian sifat biologinya, mendapatkan sumber reagen untuk pengeluaran diagnostik dan reka bentuk vaksin.

Pada masa yang sama, pertimbangan yang lebih optimistik tentang masalah ini boleh didapati dalam kesusasteraan. Penyelesaian semua isu yang berkaitan dengan penanaman virus hepatitis A adalah masalah dalam masa terdekat. Apabila mengkaji keadaan optimum untuk pembiakan HAV dalam kultur sel buah pinggang embrio kera rhesus, dua fasa telah dikenalpasti: fasa pengeluaran virus berjangkit (sehingga 6-8 hari pada tahap laluan ke-5) dan fasa pengumpulan intensif antigen virus. Ia juga menunjukkan bahawa pengumpulan antigen virus yang paling ketara berlaku di bawah keadaan yang dipanggil penanaman roller (kelalang berputar). Kaedah ini membuka peluang yang luas untuk mendapatkan antigen budaya dalam kuantiti yang banyak, dan, akibatnya, bahan sumber untuk penyediaan sistem diagnostik dan pembuatan vaksin akan muncul.

Epidemiologi hepatitis A

Virus hepatitis A sangat patogenik kepada manusia. Menurut WHO (1987), jangkitan dengan hanya satu virion sudah cukup untuk menyebabkan penyakit ini. Walau bagaimanapun, dos berjangkit praktikal mungkin lebih tinggi. Satu-satunya sumber jangkitan adalah orang yang dijangkiti. Virus ini dikumuhkan dalam kuantiti yang banyak dengan najis 12-14 hari sebelum permulaan jaundis dan semasa 3 minggu tempoh ikterik. Tiada perbezaan ketara dalam perkumuhan patogen pada pesakit dengan bentuk hepatitis A ikterik, anikterik dan asimtomatik telah dijumpai. Laluan jangkitan adalah fecal-oral, terutamanya bawaan air, serta bawaan isi rumah dan makanan. Laluan jangkitan adalah fecal-oral, terutamanya bawaan air, serta bawaan isi rumah dan makanan. Laluan utama (utama) penularan virus adalah melalui air. Jangkitan oleh titisan bawaan udara juga mungkin. Kecenderungan penduduk adalah sejagat. Kebanyakan kanak-kanak di bawah umur 14 tahun terjejas. Penyakit ini mempunyai musim luruh-musim sejuk yang ketara.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Gejala Hepatitis A

Tempoh inkubasi berbeza dari 15 hingga 50 hari, bergantung kepada dos infektif virus, tetapi secara purata adalah 28-30 hari. Sekali di dalam badan, virus hepatitis A membiak dalam nodus limfa serantau, menembusi darah, dan kemudian sel hati dan menyebabkan hepatitis meresap akut, yang disertai oleh kerosakan pada hepatosit dan unsur retikuloendothelial hati dan penurunan dalam detoksifikasi dan fungsi penghalangnya. Kerosakan pada hepatosit berlaku bukan disebabkan oleh tindakan langsung virus, tetapi akibat mekanisme imunopatologi. Gambaran hepatitis A yang paling tipikal ialah bentuk kitaran ikterik akut: tempoh inkubasi, prodromal (pra-ikterik), tempoh ikterik dan pemulihan. Walau bagaimanapun, dalam fokus jangkitan, sebilangan besar pesakit dengan bentuk jangkitan anikterik dan asimtomatik dikesan, bilangan yang ketara mendominasi yang icterik ("fenomena aisberg").

Kekebalan selepas jangkitan adalah kuat dan tahan lama, disebabkan oleh antibodi yang meneutralkan virus dan sel memori imun.

Diagnosis mikrobiologi hepatitis A

Diagnostik hepatitis A (kecuali jangkitan haiwan - cimpanzi, marmoset, babun, yang kita tidak ada) adalah berdasarkan pelbagai kaedah imunologi: RSC, kaedah imunofluoresensi, hemagglutinasi lekatan imun (kompleks antigen virus + antibodi dengan kehadiran pelengkap diserap pada eritrosit dan menyebabkan mereka melekat). Walau bagaimanapun, kemungkinan menggunakan kaedah ini adalah terhad kerana kekurangan antigen virus tertentu, dan tindak balas imunofluoresensi memerlukan biopsi hati, yang tidak diingini. Kaedah mikroskop elektron imun boleh dipercayai dan khusus, tetapi ia sangat intensif buruh. Oleh itu, setakat ini satu-satunya tindak balas imunologi yang boleh diterima ialah kaedah analisis imunosorben fasa pepejal dalam bentuk IFM atau RIM, terutamanya dalam pengubahsuaian "penangkapan" imunoglobulin kelas M. Di negara kita, sistem ujian telah dicadangkan untuk tujuan ini - "DIAGN-A-HEP". Prinsip operasi sistem ujian ini adalah seperti berikut. Pertama, antibodi kepada imunoglobulin kelas M (antiimmunoglobulin M) diserap pada dinding telaga polistirena, kemudian serum pesakit yang akan diuji ditambah. Jika ia mengandungi antibodi IgM, mereka akan mengikat anti-antibodi kelas M, kemudian antigen virus tertentu (virus hepatitis A) ditambah, yang diperoleh dengan berkembang dalam kultur sel. Sistem ini dibasuh, dan antibodi antivirus yang dilabelkan dengan lobak pedas peroksidase ditambah kepadanya. Jika keempat-empat komponen sistem berinteraksi, "sandwic" empat lapisan terbentuk:

• antiimunoglobulin M,
• immunoglobulin M (terhadap virus hepatitis A - dalam serum pesakit yang sedang dikaji),
• antigen virus,
• antibodi antivirus berlabel enzim.

Untuk mengesan kompleks ini, substrat untuk enzim ditambah ke dalam telaga. Di bawah pengaruh enzim, ia dimusnahkan, dan produk berwarna terbentuk. Keamatan warna boleh diukur secara kuantitatif menggunakan spektrofotometer atau fotokolorimeter.

Kelebihan kaedah "menangkap" IgM ialah antibodi kelas imunoglobulin ini muncul semasa tindak balas imun utama dan menunjukkan tahap jangkitan aktif, mereka hilang selepas penyakit itu dihidapi. Antibodi antivirus yang tergolong dalam kelas IgG, sebaliknya, berterusan untuk masa yang lama selepas penyakit itu dihidapi, memberikan imuniti yang diperolehi. Kaedah siasatan DNA telah dicadangkan untuk mengesan virus hepatitis A: DNA vRNA pelengkap digunakan sebagai siasatan.

Rawatan hepatitis A

Disebabkan fakta bahawa pengeluaran interferon terganggu dalam hepatitis virus, rawatan hepatitis A adalah berdasarkan penggunaan interferon dan inducer sintesis endogennya, amixin.

Pencegahan khusus hepatitis A

Seroprophylaxis hepatitis A yang digunakan secara meluas sebelum ini dengan gamma globulin tidak membenarkan dirinya sendiri, oleh itu penekanan utama diberikan pada menjalankan profilaksis vaksinasi, vaksinasi terhadap hepatitis A dijalankan. Untuk tujuan ini, pelbagai jenis vaksin sedang dibangunkan dan sedang digunakan. Di Rusia, vaksin yang berkesan terhadap hepatitis A telah diperoleh pada tahun 1995, dan kini telah berjaya digunakan.