Virus Hepatitis A.

Hepatitis A virus adalah penyakit berjangkit manusia yang dicirikan oleh kerosakan hati yang utama dan menjadi keracunan dan penyakit kuning secara klinikal. Virus Hepatitis A dikesan pada tahun 1973 oleh S. Feinstone (dan yang lain) menggunakan kaedah mikroskopi elektron imun dan dengan menjangkiti monyet - cimpanzi dan marmoset. Inti dari kaedah mikroskopi elektron imun adalah antibodi spesifik (serum pemulihan) yang ditambahkan kepada filtrat najis pesakit dengan hepatitis A dan mendakan adalah tertakluk kepada mikroskop elektron. Kerana interaksi virus dengan antibodi spesifik, mereka menjalani pengagregatan tertentu. Dalam kes ini, mereka lebih mudah untuk mengesan, dan pengagregatan di bawah pengaruh antibodi mengesahkan kekhususan patogen. Penemuan S. Feinstone disahkan dalam percubaan pada sukarelawan.

Virus Hepatitis A mempunyai bentuk sfera, diameter virion ialah 27 nm. Genom ini diwakili oleh RNA positif tunggal terkandas dengan jisim 2.6 MD. Supercapsid tidak hadir. Jenis simetri adalah kubus - icosahedron. Capsid mempunyai 32 kapsomer, dibentuk oleh empat polipeptida (VP1-VP4). Oleh sifatnya, virus hepatitis A tergolong dalam genus Heparnovirus, keluarga Picornaviridae. Secara antigen, virus hepatitis A (virus HAV - hepatitis A) adalah homogen. HAV mengalir dengan baik dalam tubuh cimpanzi, babi, hamadryl dan monyet judi (marmoset). Untuk masa yang lama, virus tidak dapat ditanam. Hanya pada 1980-an. Ia adalah mungkin untuk mendapatkan budaya sel di mana HAV menyebar. Pada mulanya, untuk tujuan ini, garis buah ginjal rhesus monyet yang dipindahkan (budaya FRhK-4) telah digunakan, dan kini - garis transplantasi sel ginjal monyet hijau (budaya 4647).

Menurut cadangan pakar-pakar WHO, tataliti berikut penanda virus hepatitis A telah diguna pakai: hepatitis A virus-NAU antibodi kepada virus hepatitis A: IgM anti-NAV dan anti-NAV IgG.

HAV adalah zarah kecil dengan diameter 27-30 nm, mempunyai simetri icosahedral dan memiliki homogen. Mengenai corak difraksi elektron yang diperolehi oleh kaedah pengagregatan imun, zarah elektron-padat dengan kapitalis yang tersusun secara simetrik telah diketemukan. Dengan kontras yang negatif, kedua-dua zarah yang lengkap dan kosong dikesan dalam persediaan. NAV nukleokapsid, tidak seperti influenza, tidak mempunyai protrusions permukaan dan membran. Ia juga penting bahawa HAV virion tidak mempunyai struktur berbentuk jantung.

Mengikut ciri-ciri fizikal-kimia Hepatitis Virus adalah berkaitan dengan keluarga Picornaviridae, genus Enterovirus dengan nombor atom 72. Walau bagaimanapun, taksonomi ini terlalu luar biasa, dan WHO mendapati ia mungkin untuk meninggalkan istilah "hepatitis A virus".

Seperti semua virus keluarga Picornaviridae, virus hepatitis A mengandungi asid ribonukleik. Beberapa makmal telah menunjukkan kemungkinan mengklonkan genom virus hepatitis A, yang membuka peluang untuk mendapatkan persediaan vaksin.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Rintangan virus hepatitis A

Virus ini agak tahan terhadap suhu tinggi, asid, pelarut lemak (tidak ada lipid), kuman pembasmian kuman, ia bertolak ansur dengan suhu yang rendah. Semua ini menyumbang kepada pemeliharaan jangka panjang dalam persekitaran luaran. Pada suhu bilik, ia bertahan selama beberapa minggu, pada suhu 60 ° C kehilangan sebahagiannya selepas 4-12 jam, sepenuhnya - selepas beberapa minit pada suhu 85 ° C Sangat tahan terhadap klorin, kerana ia mampu menembusi air paip melalui halangan tumbuhan rawatan air.

Menyimpulkan semua data, kita boleh mencirikan virus hepatitis A seperti berikut:

• tuan alami adalah manusia;
• haiwan eksperimen - marmozet, simpanse;
• sumber jangkitan - najis;
• penyakit - epidemik dan endemik;
• laluan penghantaran adalah fecal-oral;
• tempoh pengeraman - 14-40 hari;
• peralihan kepada hepatitis kronik - tidak diperhatikan.

Sifat imunologi NAB adalah seperti berikut:

• Strain prototaip - Ms-l, CR-326, GVG. Semua imunologi sama atau serupa;
• Antibodi - IgM dan IgG, dihasilkan sebagai tindak balas kepada pengenalan protein struktur virus dan perlindungan;
• I Tindakan trophic serum manusia y-globulin - melindungi atau menyembuhkan penyakit di bawah keadaan pentadbiran sebelum jangkitan atau semasa tempoh inkubasi.

Ciri-ciri fiziko-kimia NAU adalah seperti berikut:

• Morfologi adalah zarah sfera bukan shell dengan simetri padu, kapsid terdiri daripada 32 kapten;
• Diameter ialah 27-30 nm;
• Ketumpatan dalam CsCl (g / cm3) adalah 1.38-1.46 (zarah terbuka), 1.33-1.34 (virion matang), 1.29-1.31 (virions tidak matang, zarah kosong);
• Pekali sedimentasi adalah 156-160 virion matang;
• Asid nukleik - RNA linier tunggal, terdampar;
• Berat molekul relatif - 2,25 106-2,8 106KD;
• Bilangan nukleotida ialah 6,500-8,100.

Kestabilan NAV dalam kesan fizikokimia adalah seperti berikut:

• Chloroform, eter - stabil;
• Klorin, 0.5-1.5 mg / l, 5 ° C, 15 min - ketidakaktifan separa;
• Chloramine, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - inaktivasi lengkap;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 jam - penolakan yang tidak lengkap, 1: 350, 20 ° C, 60 min - penyahaktifan separa.

Suhu:

• 20-70 ° C - stabil;
• 56 ° C, 30 minit - ia stabil;
• 60 ° C, 12 jam - pengaktifan separa;
• 85 ° C, 1 min - inactivation penuh;
• Autoklaf, 120 ° C 20 minit - tidak aktif sepenuhnya;
• Haba kering, 180 ° C, 1h - penyahaktifan lengkap;
• UV, 1.1 W, 1 min - tidak aktif sepenuhnya.

Data yang dikemukakan menunjukkan bahawa sifat fizikokimia virus hepatitis A adalah yang paling dekat dengan enterovirus. Seperti enterovirus lain, HAV tahan banyak penyelesaian disinfektan, sepenuhnya tidak aktif selama beberapa minit pada suhu 85 ° C dan autoklaf.

Ia membuktikan bahawa hepatitis virus A boleh membiak dalam budaya monolayer rendah dan berterusan barisan sel manusia, dan monyet. Pembiakan terutamanya aktif hepatitis A virus di dalam vitro budaya diperhatikan apabila menggunakan sebagai bahan permulaan ekstrak pesakit hati monyet. Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa dalam semua eksperimen mengikut suatu pengeluaran semula hepatitis A virus di dalam vitro budaya diperhatikan tempoh pengeraman lama dalam saluran utama (-10 hingga 4 minggu), kemudiannya pengumpulan virus kenaikan bahan genetik, tetapi nilai-nilai mutlak sangat tidak penting, yang memberi alasan kepada ramai penyelidik untuk membincangkan replikasi virus hepatitis A yang tidak lengkap dalam budaya tisu.

Meringkaskan data kesusasteraan tentang pembiakan virus hepatitis A dari budaya bukan akar, boleh dikatakan bahawa fakta pengalaman berpanjangan HAV in vitro tidak dapat dipertanyakan. Keadaan yang optimum untuk stabil tahap tinggi virus replikasi tidak sepenuhnya pasti, dan ini mengekang mengkaji sifat-sifat biologi, mendapatkan reagen sumber untuk pengeluaran diagnostik dan vaksin neraka pembinaan.

Pada masa yang sama, penilaian yang lebih optimis tentang masalah ini boleh didapati dalam kesusasteraan. Penyelesaian semua isu yang berkaitan dengan penanaman virus hepatitis A adalah satu perkara untuk masa depan yang terdekat. Ketika mengkaji keadaan yang optimum HAV pembiakan dalam kultur sel buah pinggang embrio monyet rhesus mendedahkan dua fasa: fasa pengeluaran virus berjangkit (sehingga 6-8 hari di laluan ke-5) dan fasa pengumpulan intensif antigen virus. Ia juga menunjukkan bahawa pengumpulan yang paling penting antigen virus berlaku di bawah syarat-syarat penanaman roller yang dipanggil (botol berputar). Cara ini membuka kemungkinan mendapatkan budaya antigen dalam kuantiti yang besar, dan seterusnya akan bermula bahan untuk penyediaan sistem diagnostik dan pengeluaran persediaan vaksin.

Epidemiologi hepatitis A

Virus Hepatitis A mempunyai patogenik tinggi untuk manusia. Menurut kesimpulan WHO (1987), untuk permulaan penyakit ini, cukup untuk menginfeksi hanya satu virion. Walau bagaimanapun, dos berjangkit praktikal mungkin lebih tinggi. Sumber jangkitan hanya orang yang dijangkiti. Virus ini dikeluarkan dalam kuantiti yang besar dengan najis 12-14 hari sebelum kemunculan jaundis dan dalam masa 3 minggu. Tempoh icterik. Perbezaan ketara dalam pengasingan patogen pada pesakit dengan hepatitis A, penyakit kuning dan penyakit asimtomatik belum diketahui. Kaedah jangkitan adalah fecal-oral, terutamanya berair, dan juga oleh laluan rumah dan makanan. Kaedah jangkitan adalah fecal-oral, terutamanya berair, dan juga oleh laluan rumah dan makanan. Laluan utama (utama) penghantaran virus adalah air. Ia juga mungkin untuk jangkitan bawaan udara. Kerentanan penduduk adalah sejagat. Kebanyakan kanak-kanak di bawah umur 14 tahun sakit. Penyakit ini mempunyai musim bermulanya musim luruh yang jelas.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Gejala hepatitis A

Tempoh inkubasi berbeza dari 15 hingga 50 hari, yang bergantung kepada jumlah dos yang dijangkiti virus, tetapi secara purata adalah 28-30 hari. Sekali dalam badan, hepatitis virus A replikasi dalam nodus limfa, ke dalam darah dan seterusnya ke sel-sel hati dan menyebabkan hepatitis akut resap yang disertai dengan luka-luka hepatosit hati dan sel-sel reticuloendothelial dan penurunan dalam detoksifikasi dan halangan fungsinya. Kerosakan kepada hepatosit tidak berlaku akibat tindakan langsung virus, tetapi akibat mekanisme imunopatologi. Gambar yang paling tipikal hepatitis A akut bentuk icteric kitaran: tempoh pengeraman, prodromal yang (preicteric), penyakit kuning dan tempoh pemulihan. Walau bagaimanapun, dalam tumpuan jangkitan mendedahkan sejumlah besar pesakit dengan bentuk asimptomatik dan anicteric jangkitan, bilangan yang berpengaruh lebih icteric ( "fenomena aisberg").

Imuniti pasca menular adalah kuat dan berkekalan, yang disebabkan oleh antibodi virus meneutralkan dan sel memori imun.

Diagnosis mikrobiologi hepatitis A

Diagnosis hepatitis A (kecuali haiwan jangkitan - cimpanzi marmozet, babun, yang kita) berdasarkan pelbagai kaedah imunologi: Kaedah immunofluorescence DGC, hemagglutination lekatan imun (kompleks antigen virus + antibodi di hadapan pelengkap terjerap pada eritrosit dan menyebabkan lekatan mereka) . Walau bagaimanapun, kesesuaian kaedah ini adalah terhad kerana kekurangan antigen virus tertentu dan reaksi immunofluorescence memerlukan biopsi hati, yang tidak diingini. Boleh dipercayai dan spesifik adalah kaedah mikroskop elektron imun, tetapi sangat susah. Oleh itu, sehingga satu-satunya kaedah yang boleh diterima bagi tindak balas imunologi adalah imunoserapan asai fasa pepejal dalam bentuk IPM, atau RIM, terutama dalam pengubahsuaian daripada "menangkap" imunoglobulin M. Di negara kita untuk tujuan yang dicadangkan ini sistem ujian - "DIAG-A-GEO". Prinsip kerja sistem ujian ini adalah seperti berikut. Di dinding polistirena lunochek sorbed antibodi pertama untuk imunoglobulin kelas M (M antiimmunoglobuliny) kemudiannya ditambah kepada serum pesakit yang dikaji. Jika ada kelas antibodi IgM, mereka akan mengikat kepada antibodi-Ti-M, kemudian ditambah kepada antigen tertentu virus (virus hepatitis A), yang diperolehi dengan berkembang dalam budaya sel. Sistem ini dibasuh dan antibodi antivirus yang dilabelkan dengan racun peroxidase ditambah kepadanya. Sekiranya kesemua empat komponen sistem berinteraksi, empat lapisan "sandwic" timbul:

• antiimmunoglobulins M,
• imunoglobulin M (terhadap virus hepatitis A - dalam serum ujian pesakit),
• antigen virus,
• antibodi antivirus yang dilabelkan dengan enzim.

Untuk mengesan kompleks ini, satu substrat untuk enzim ditambah kepada lunet. Di bawah pengaruh enzim, ia dimusnahkan, dan produk berwarna dibentuk. Keamatan warna dapat diukur secara kuantitatif dengan spektrofotometer atau photocolorimeter.

Kelebihan kaedah "penangkapan" IgM adalah bahawa antibodi kelas imunoglobulin ini muncul pada tindak balas imun utama dan menunjukkan tahap jangkitan aktif, mereka hilang selepas penyakit yang dipindahkan . Antibodi antibodi milik kelas IgG, sebaliknya, berterusan untuk masa yang lama selepas penyakit itu, memastikan imuniti yang diperolehi. Untuk mengesan virus hepatitis A, kaedah penyelidikan DNA dicadangkan: probe vRNA pelengkap digunakan sebagai penyelidikan.

Rawatan hepatitis A

Oleh sebab pengeluaran interferon terganggu dalam hepatitis virus, rawatan hepatitis A adalah berdasarkan penggunaan interferon dan induk amixin sintesis endogennya.

Pencegahan spesifik hepatitis A

Sebelum ini digunakan secara meluas hepatitis seroprevention A gammaglobulin menggunakan tidak berasas, bagaimanapun, penekanan telah diberikan terhadap imunisasi pegangan, yang dibawa pelalian hepatitis A. Untuk tujuan ini, pelbagai varian vaksin sedang dibangunkan dan sedang digunakan. Di Rusia, vaksin yang berkesan terhadap hepatitis A diperoleh kembali pada tahun 1995, dan sekarang ia telah berjaya diterapkan.