Ujian urease 13c: penyediaan, keputusan, positif, negatif

Sejak penemuan bakteria Helicobacter pylori yang dikaitkan dengan gastritis kronik dan ulser gastrik dan duodenal, kaedah diagnostik telah dibangunkan, termasuk ujian urease, yang membolehkan pengesanan mikroorganisma ini dalam pesakit tertentu, mengesahkan penglibatan mereka dalam perkembangan penyakit gastrousus dan menetapkan rawatan yang berkesan.

Enzim urease sebagai biomarker jangkitan Helicobacter

Bakteria H. pylori melindungi diri mereka daripada persekitaran berasid dalam lumen perut dalam dua cara. Pertama, dengan merosakkan membran mukus dengan flagelanya, mikroorganisma mencapai lapisan bawahnya, terus ke sel epitelium, di mana pH lebih tinggi (iaitu, keasidan lebih rendah). Kedua, bakteria meneutralkan asid dengan mensintesis kuantiti besar urease metalloenzim molekul tinggi yang aktif secara pemangkin atau urea amidohidrolase.

Penggunaan urease dalam diagnosis Helicobacter adalah mungkin kerana bukan sahaja aktiviti sitoplasma enzim ini, tetapi juga interaksi luaran dengan sel perumah.

Di bawah tindakan urease, pemecahan urea gastrik kepada hidrogen nitrida (ammonia) dan karbon dioksida (karbon dioksida) berlaku. Mereka bertindak balas dengan asid hidroklorik dalam jus gastrik dan memberikan zon keasidan neutral di sekitar H. pylori, dan juga menyokong metabolisme sel bakteria.

Inilah sebabnya mengapa urease adalah faktor yang paling penting dalam penjajahan H. pylori dalam mukosa gastrik manusia, dan pengesanan aktiviti ureolitik dianggap sebagai biomarker virulensi bakteria ini, yang ahli gastroenterologi - dengan menjalankan ujian urease - gunakan untuk mendiagnosis jangkitan Helicobacter, serta untuk memantau keputusan pemusnahan bakteria (dibadam) oleh ubat-ubatan.

Diagnostik H. pylori termasuk ujian invasif dan bukan invasif – bergantung kepada sama ada pemeriksaan endoskopik perut (fibrogastroduodenoscopy) diperlukan atau tidak. Ujian invasif ialah ujian urease pantas atau ujian urease ekspres (RUT-ujian), yang memerlukan mendapatkan sampel tisu (biopsi). Ujian nafas urea 13C (13C-UBT) ialah ujian bukan invasif yang paling biasa.

Perlu diingatkan bahawa diagnostik bukan invasif H.pylori boleh dilakukan menggunakan ujian darah untuk antibodi (kekhususan pada tahap 75%, kepekaan - 84%), ELISA air kencing (dengan kepekaan 96% dan kekhususan 79%), dan coprogram untuk antigen bakteria. Maklumat lanjut - Jangkitan Helicobacter pylori: antibodi kepada Helicobacter pylori dalam darah

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Petunjuk untuk prosedur ujian urease

Penjajahan mukosa gastrik oleh H. pylori sendiri bukanlah penyakit; ia adalah faktor peningkatan beban bakteria pada badan, yang dalam keadaan tertentu boleh mencetuskan perkembangan beberapa patologi perut dan saluran gastrousus atas.

Petunjuk untuk diagnostik jangkitan Helicobacter, khususnya, ujian urease, dikaitkan dengan gastritis dengan peningkatan keasidan, gastritis antral dan atropik, duodenitis, ulser gastrik dan ulser duodenal, limfoma MALT gastrik. Selepas reseksi endoskopik kanser gastrik peringkat awal, pemeriksaan histologi boleh dilakukan dalam kombinasi dengan ujian urease cepat - FGDS dengan ujian urease.

Pakar gastroenterologi boleh menetapkan ujian urease jika pesakit mengadu tentang rasa berat dan ketidakselesaan di kawasan epigastrik, pedih ulu hati yang kerap selepas makan, sendawa masam atau busuk, kepahitan di dalam mulut, loya, gangguan usus, sakit atau kekejangan di perut.

[ 8 ], [ 9 ]

Persediaan

Persediaan untuk ujian nafas urea 13C terdiri daripada pesakit berhenti: mengambil antibiotik 4 minggu sebelum ujian, dan NSAID, perencat pam proton (mengurangkan keasidan perut) dan antasid atau penjerap yang digunakan untuk pedih ulu hati - sekurang-kurangnya dua minggu sebelum itu. Mengambil sebarang ubat harus dihentikan lima hingga enam hari, dan minum alkohol dan merokok - tiga hari sebelum ujian.

Ia juga disyorkan untuk mengelakkan makan kekacang selama kira-kira seminggu sebelum ujian, kerana kacang, kacang, lentil, kacang soya dan kacang mengandungi urease (yang melindungi tumbuhan daripada penyakit dan perosak serangga).

Petang sebelum ujian, makan malam berat lewat adalah kontraindikasi; pada hari ujian, anda harus melakukan kebersihan mulut biasa, dan satu setengah jam sebelum ujian, anda tidak boleh minum apa-apa atau menggunakan gusi.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Teknik ujian urease

Teknik pelaksanaan:

• Pertama, sampel pernafasan asas diambil - hembusan dibuat ke dalam bekas plastik lembut (dan ditutup rapat);
• cecair dengan tambahan 13C-urea diambil secara lisan;
• Selepas 25-30 minit, sampel kedua udara yang dihembus dibawa ke dalam bekas lain.

Sampel yang diperoleh dengan cara ini dianalisis pada spektrometer jisim dengan pengasingan isotop dalam sampel kedua dan penentuan kepekatannya. Perbezaan antara nilai dalam sampel kedua dan pertama dinyatakan sebagai delta (δ) berbanding dengan tahap garis dasar. Nilai normal, iaitu nilai negatif atom berlabel 13C pada pesakit yang tidak dijangkiti berbeza dari 0.15-0.46%, dan nilai positif dengan kehadiran jangkitan adalah 1.2-9.5% dengan kadar hidrolisis urea lebih daripada 12-14 μg/min.

Ringkasnya: pengesanan karbon dioksida berlabel 13C dalam udara yang dihembus menunjukkan bahawa urea telah dihidrolisiskan oleh enzim urease H. pylori, yang, sebenarnya, mengesahkan fakta kehadirannya di dalam perut.

Ujian nafas H. pylori

Ujian 13C-UBT atau ujian nafas urea 13C untuk Helicobacter pylori ialah salah satu kaedah bukan invasif yang paling penting untuk mengesan jangkitan ini: dengan kepekaan 100% dan kekhususan 98%, risiko keputusan positif palsu dan negatif palsu berbanding ujian histologi dan antibodi darah adalah 2.3% lebih rendah.

Analisis adalah berdasarkan hidrolisis urea cecair yang diberikan secara lisan yang dilabelkan dengan atom karbon (isotop bukan radioaktif stabil) 13C (50-75 mg 13C-urea yang dicairkan dalam 100 ml cecair) oleh H. pylori urease.

Urea yang dilabelkan dengan penunjuk isotop mengalami hidrolisis dalam perut dengan pembebasan ammonia dan karbon dioksida yang mengandungi atom berlabel, yang meresap ke dalam darah dan dikeluarkan dari paru-paru semasa bernafas. Karbon dioksida yang dilabelkan direkodkan oleh peranti analisis - spektrometer jisim, yang operasinya berdasarkan spektroskopi selektif isotop bukan penyebaran, atau penganalisis spektroskopi inframerah.

Ujian urease cepat

Ujian Rapid Urease (RUT) dilakukan semasa pemeriksaan endoskopik perut dan duodenum - menggunakan endofibroskop moden - dan pengumpulan sampel biopsi serentak. Biomaterial sepatutnya diambil dari bahagian antral perut. Jadi fibrogastroduodenoscopy atau FGDS dengan ujian urease adalah kaedah diagnostik invasif.

Biopsi yang diperolehi direndam sepenuhnya dalam medium piawai yang disediakan yang mengandungi gel agar, urea, fenolsulfoftalein penunjuk asid-bes dan agen bakteriostatik (ditambah untuk menghalang pertumbuhan mikroorganisma yang mencemari dan keputusan positif palsu).

Jika bakteria H. pylori terdapat dalam sampel tisu perut, urease yang dihasilkannya akan menghidrolisis urea dan menaikkan pH, yang jelas kelihatan apabila penunjuk berubah daripada kuning kepada oren (pada pH 6.8) dan ungu (pada pH> 8). 75% daripada ujian positif bertukar warna dalam masa 120-180 minit, dan lebih cepat penunjuk berubah warna, lebih banyak bilangan bakteria. Tetapi ujian yang kelihatan negatif disimpan selama 24 jam.

Ujian Rapid Urease Positif, Apakah Maksudnya? Ujian RUT positif - penunjuk bertukar merah - bermakna sampel biopsi yang diletakkan dalam medium agar mengandungi sekurang-kurangnya 105 bakteria H. pylori, walaupun kepekatannya biasanya lebih tinggi.

Kepekaan pelbagai pengubahsuaian ujian berbeza-beza dalam julat 90-98%, dan kekhususan - 97-99%.

Seperti yang dinyatakan oleh ahli gastroenterologi, jika kesimpulan pesakit menunjukkan ujian urease yang sangat positif (tiga salib), ini bermakna: pH> 8, dan penunjuk berubah warna dalam masa kurang daripada 60 minit dari saat rendaman biopsi, yang menunjukkan sejumlah besar H.pylori dan tahap ekspresi urease yang tinggi. Anggaran bilangan bakteria boleh dikira semasa pemeriksaan histologi biopsi di bawah mikroskop, dan jika melebihi 40-50 di kawasan yang divisualisasikan, tahap jangkitan dianggap tinggi.

Ujian nafas urea 13C jarang memberikan keputusan positif palsu, dan pada pesakit yang disyaki mengalami ulser gastrik atau duodenal, satu ujian positif dianggap untuk mengesahkan diagnosis, manakala keputusan negatif harus disahkan oleh EGD dengan ujian urea.