Penyelidikan imunologi dalam urologi

Penugasan imunogram kepada pesakit urologi bermakna bahawa doktor yang menghadiri menganggap adanya gangguan dalam sistem kekebalan tubuh. Salinan bakteria, virus, jangkitan kulat, reaksi alahan, penyakit sistemik boleh menjadi tanda-tanda gangguan ini, yang disifatkan oleh beberapa sindrom (jangkitan, kanser, alahan, autoimun, lymphoproliferative). Satu pesakit mungkin mempunyai beberapa sindrom. Sebagai contoh, penyakit berjangkit kronik (sindrom berjangkit) boleh menyebabkan kurang daya tahan dan kurang daya tahan boleh dimanifestasikan kecenderungan kepada penyakit berjangkit dan kanser (Sindrom Kanser). Mudah mendapat jangkitan boleh berlaku terhadap latar belakang immunodeficiency menengah, yang mengalami penyakit lymphoproliferative kerana, seperti leukemia. Terdapat tiga kumpulan utama perubahan patologi dalam sistem imun:

• kekurangan kuantitatif atau fungsi satu atau lain-lain pautan imuniti, yang membawa kepada pembangunan keadaan imunodefisiensi;
• pelanggaran dalam pengiktirafan antigen oleh sistem imun, yang membawa kepada perkembangan proses autoimun;
• hiperaktif atau "menyimpang" tindak balas imun, yang ditunjukkan oleh perkembangan penyakit alah.

Terdapat pemeriksaan (ujian peringkat 1) dan kaedah pemeriksaan immunodiagnostik yang layak (ujian tahap 2). Yang pertama ada untuk memperbaiki pelanggaran sistem kekebalan tubuh, yang kedua - untuk membentuk mekanisme yang terlibat dalam pelaksanaannya untuk tujuan imunokoreksi lanjut.

Pautan B-Selular imuniti

Kaedah pemeriksaan

• Penentuan bilangan relatif dan mutlak B-limfosit melalui immunofluorescence atau aliran sitometri menggunakan antibodi monoklonal kepada antigen B-sel (CD19, CD20, di mana CD - kelompok pembezaan). Kandungan limfosit B di kalangan orang dewasa normal: 8-19% daripada jumlah leukosit atau 190-380 sel / ml. Meningkatkan kandungan limfosit B berlaku dalam jangkitan bakteria dan kulat akut dan kronik, penyakit kronik hati, sistemik penyakit tisu perantara, leukemia lymphocytic kronik, multiple myeloma.
• Penentuan kepekatan imunoglobulin nespespetsificheskih (F, M, G, E) dengan immunodiffusion tunggal radial, atau nephelometry turbometrii, radioimunocerakinan atau immunoassay enzim (EIA). Norma untuk orang dewasa: immunoglobulin (Ig) 0.9-4.5 g / l. IgM 03-3.7 g / l. IgG 8.0-17 g / l. Peningkatan kepekatan imunoglobulin berlaku dengan keadaan patologi yang sama di mana peningkatan dalam kandungan limfosit B berlaku. Mengurangkan kepekatan imunoglobulin di hypogammaglobulinemia kongenital, tumor sistem imun, penyingkiran limpa, kehilangan protein, dalam penyakit buah pinggang atau usus, rawatan dengan cytostatics dan immunodepreesantami.

Menentukan kaedah

• Penentuan kompleks imun yang beredar dalam darah dengan pemilihan selektif dalam polysilena glikol diikuti oleh ujian ketumpatan spektrofotometri (80-20 UE biasa). Peningkatan kompleks imun yang beredar adalah ciri untuk bakteria akut, kulat, jangkitan virus, autoimun, penyakit imunokompleks, penyakit serum, tindak balas alahan jenis 3;
• Penentuan imunoglobulin tertentu dalam darah berhubung dengan antigen bakteria dan virus, asid deoksiribonukleik (DNA) dalam penyakit autoimun, pengenalan sperma (kemandulan autoimun) dan antibodi protivopochechnyh (pyelonephritis dan glomerulonephritis) dengan immunodiffusion jejari atau ELISA.
• Penentuan antibodi antisperm dalam sperma [MAR-test (reaksi antiglobulin campuran)], norma negatif.
• Penentuan kepekatan immunoglobulin dalam air kencing untuk tujuan diagnosis pembezaan antara pyelonephritis dan glomerulonephritis (selektiviti proteinuria).
• Penentuan IgE dalam jus prostat untuk diagnosis prostatitis alergi oleh immunodiffusion radial atau ELISA. 
• Penyelidikan sebagai tindak balas blasttransformation reaksi limfosit B pada mitogen B-sel (pokeweed mitogen untuk rangsangan tindak balas blasttransformation B-limfosit di hadapan T-limfosit), di mana nilai standard 95-100%.

Pautan t-sel imuniti

Kaedah pemeriksaan

• Penentuan bilangan relatif dan mutlak matang CD3 T reaksi limfosit oleh immunofluorescence atau aliran cytofluorometry menggunakan anti-SDZ antibodi monoklonal. Norma untuk orang dewasa adalah 58-76% atau 1100-1700 sel / μl. Mengurangkan bilangan T-limfosit imuniti sel penunjuk kegagalan. Ini adalah ciri-ciri beberapa kekurangan daya tahan menengah dan rendah (jangkitan bakteria dan virus kronik: batuk kering, Sindrom imun kekurangan, kanser, kegagalan buah pinggang kronik, trauma, tekanan, penuaan, kekurangan zat makanan, rawatan dengan ubat sitotoksik, sinaran mengion). Meningkatkan bilangan T-limfosit adalah terhadap latar belakang hiperaktif imun atau penyakit lymphoproliferative. Apabila keradangan bilangan T-limfosit yang pertama dinaikkan dan kemudian diturunkan. Tiada pengurangan dalam T-limfosit menunjukkan keradangan kronik.
• Penilaian dari subpopulasi limfosit.
  • Menentukan bilangan sel-sel T-helper (anti-CD4 antibodi). Biasanya, 36-55% atau 400-1100 sel / μl. Meningkatkan bilangan sel-sel ini berlaku dalam penyakit autoimun, penyakit Waldenstrom ini, imun pengaktifan antitransplantatsionnogo; pengurangan dalam bilangan sel-sel T-helper berlaku pada bakteria, virus, jangkitan kronik protozoa, batuk kering, sindrom kurang daya tahan, keganasan, terbakar, trauma, kekurangan zat makanan, penuaan, rawatan cytostatics, sinaran mengion.
  • Penentuan bilangan penindas T (antibodi anti-CD4). Biasanya, 17-37% atau 300-700 sel / μl. Peningkatan jumlah penindas T berlaku di bawah keadaan yang sama di mana mengurangkan jumlah sel-sel T-pembantu dan pengurangan mereka di bawah keadaan yang sama di mana kandungan sel-sel T-helper bertambah.
  • Indeks imunoregulatory CD4 / CD8, dalam norma 1,5-2,5. Hyperactivity pada kadar lebih daripada 2.5 (penyakit alergi dan autoimun); hipoaktif - kurang daripada 1.0 (kecenderungan untuk jangkitan kronik). Pada permulaan proses keradangan, indeks immunoregulatory meningkat, dan apabila ia berkurang, ia normal.

Menentukan kaedah

• Penentuan bilangan pembunuh semulajadi (sel NK) - anti-CD16 dan anti-CD56-antibodi. Norma untuk CD-limfosit 16 ialah 6-26%, CD56 - 9-19%. Meningkatkan bilangan NK-sel berlaku dalam rasuah penolakan, mengurangkan - dalam jangkitan virus, kanser, daya tahan primer dan sekunder, terbakar, trauma dan tekanan, rawatan dengan cytostatics dan sinaran mengion. 
• Penentuan bilangan limfosit T dengan reseptor untuk interleukin-2 (penanda pengaktifan) - anti-CD25 antibodi. Norma adalah 10-15%. Peningkatan bilangan mereka diperhatikan dalam penyakit alergi, penolakan pemindahan, tindak balas terhadap antigen-dependent thymus dalam jangkitan utama jangkitan utama, penurunan dalam penyakit yang sama di mana bilangan sel NK berkurangan.
• Pemeriksaan ekspresi penanda pengaktifan - molekul histokompatibiliti kelas II HLA-DR. Ekspresi yang meningkat berlaku dalam proses keradangan, pada pesakit hepatitis C, penyakit seliak, sifilis, jangkitan pernafasan akut.
• Penilaian apoptosis limfosit. Petunjuk kesediaan limfosit apoptosis boleh dikenal pasti dengan ungkapan mereka permukaan Fas-reseptor (CD95) dalam mitokondria dan bd-2 protooncogene. Apoptosis telah dinilai oleh pemprosesan limfosit dua pencelup pendarfluor: iodida propidium, yang mengikat kepada serpihan DNA dan annexin Y, mengikat kepada phosphatidylserine di membran sel yang terdapat pada awal apoptosis. Penilaian keputusan dijalankan pada aliran cytofluorimeter. Pengiraan keputusan adalah berdasarkan kepada nisbah sel yang berwarna dengan pelbagai pewarna. Sel unstained adalah sel-sel yang berdaya maju, dikaitkan hanya dengan annexin Y itu, - tanda-tanda awal apoptosis, dengan iodida propidium dan annexin I - manifestasi lewat apoptosis, mengotorkan hanya propidium iodida menunjukkan nekrosis.
• Evaluasi percambahan T-limfosit secara in vitro.
  • Perubahan dalam blastogenesis sel adalah tindak balas transformasi letupan limfosit. Leukosit diinkubkan dengan mana-mana mitogen dari tumbuhan asal (lectins). Phytohemagglutinin yang lebih biasa digunakan selama 72 jam, kemudian membuat smear, noda dan menghitung jumlah letupan! Rangsangan indeks - nisbah peratus sel berubah dalam eksperimen (budaya dengan PHA) kepada peratus sel berubah dalam kawalan (budaya tanpa PHA). Reaksi transformasi letupan limfosit boleh dinilai untuk dimasukkan ke dalam sel-sel radiolabel berbudaya (SH timndin), kerana pembahagian sel meningkat sintesis DNA. Gangguan dalam tindak balas proliferatif berlaku di dalam immunodeficiencies primer dan sekunder yang berkaitan dengan jangkitan, penyakit onkologi, kekurangan buah pinggang, dan campur tangan pembedahan.
  • Penilaian kajian ini, ungkapan penanda pengaktifan (CD25, transferrin reseptor ke - CD71) molekul dan MHC kelas II HLA-DR, yang sebahagian besarnya tidak hadir pada berehat T-limfosit. T limfosit dirangsang dengan phytohemagglutinin selepas 3 hari ungkapan penanda pengaktifan dianalisis dengan immunofluorescence langsung atau tidak langsung, aliran sitometri menggunakan antibodi monoklonal dirembeskan reseptor.
  • Mengukur jumlah mediator disintesis oleh limfosit T diaktifkan [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferon, dan lain-lain], By radioimunocerakinan atau ELISA. Terutama pentingnya ialah penilaian kepekatan y-interferon dan IL-4 sebagai penanda TH dan Th2 dalam supernatant dari budaya aktif dan dalam sel. Jika boleh, ia adalah berguna untuk menentukan ekspresi gen untuk cytokine yang berkaitan dengan tahap Rasul asid ribonucleic di threonine menghasilkan sel dan ungkapan reseptor keamatan bagi cytokines masing-masing.
    
• Reaksi perencatan penghijrahan limfosit. T-limfosit yang sensitif dalam tindak balas dengan limfokin pelepasan antigen, termasuk faktor. Menghalang penghijrahan limfosit. Fenomena perencatan diperhatikan apabila mitogens diperkenalkan ke dalam budaya sel. Penilaian tahap perencatan memungkinkan untuk menilai kemampuan limfosit untuk melepaskan sitokin. Biasanya, kekerapan penghijrahan, bergantung kepada mitogen tertentu, ialah 20-80%.
• Penilaian sitotoksisiti sel NK. Tentukan keupayaan sel pembunuh semulajadi untuk membunuh sel sasaran garis erythromyeloid K-562. Jika sitotoksisiti bergantung kepada antibodi dinilai, sel-sel sasaran yang disalut dengan antibodi IgG digunakan. Sel sasaran dilabel dengan 3H-uridin dan diinkubasi dengan sel-sel effector. Kematian sel sasaran dianggarkan dari pelepasan label radioaktif ke dalam penyelesaian. Pengurangan sitotoksisiti berlaku dengan neoplasma malignan. Dalam sesetengah kes, apabila prognosis keberkesanan rawatan dengan interleukin diperlukan, sitotoksisitas sel NK dinilai ketika diinkubasi dengan sitokin tertentu.

Penyiasatan fungsi fagosit

Kaedah pemeriksaan

Penyiasatan penyerapan sel-sel mikroba oleh fagosit (fagositosis zarah lateks, kultur ujian staphylococcus, Escherichia coli, atau mikroorganisma yang diasingkan daripada pesakit). Dengan sentrifugasi darah heparinized, penggantungan leukosit diasingkan, serum kumpulan darah IV ditambah untuk opsonisasi (opsonin adalah protein yang meningkatkan fagositosis). Penggantungan mikroba dicairkan, bercampur dengan leukosit dan diinkubasi selama 120 minit, pensampelan untuk analisis selepas 30.90.120 min selepas permulaan inkubasi. Daripada penggantungan leukocyte yang terpilih membuat smear. Tentukan penunjuk fagositosis berikut:

• indeks fagositik - peratusan sel yang memasuki fagositosis dalam 30 minit dan inkubasi 120 min; nilai normatif dari indeks fagositik (30) 94% daripada indeks fagositik (120) - 92%;
• nombor phagocytic - jumlah purata bakteria yang intrasel; nilai normatif nombor phagocytic (30) 11%, nombor phagocytic (120) - 9.8%;  
• pekali nombor phagocytic - nisbah nombor fagositik (30) ke nombor fagositik (120); normal 1.16;
• indeks bakterisida neutrofil adalah nisbah bilangan mikrob yang terbunuh di dalam fagosit kepada jumlah mikrob yang diambil; dalam norma 66%.

Menentukan kaedah

• Penyiasatan aktiviti bakterisida fagosit dalam ujian dengan nitrosine tetrazolium (NST) adalah ujian NST. Untuk leukosit, pewarna nitrous oksida tetrazolium ditambah dalam kuning. Apabila pewarna diserap oleh neutrophil, proses pengurangan berlaku di bawah tindakan radikal bebas oksigen, menyebabkan pewarnaan biru. Tindak balas dilakukan di plat rata rata-rata 96-rata. Dalam tiga telaga pertama dengan campuran HCT dan leukosit, larutan Hanks (HCT spontan) ditambahkan, dalam zarah lateks yang kedua; tenggelam pada 37 ° C selama 25 minit. Hasilnya dibaca pada 540 nm pada pembaca dan dinyatakan dalam unit konvensional. Kirakan faktor rangsangan (K _st ), sama dengan nisbah ketumpatan optik dalam telaga yang dirangsang ke ketumpatan optik rata-rata dalam telaga tanpa rangsangan. Pada orang yang sihat, _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1.78 ± 0.36.
• Penyiasatan molekul adhesi. Dengan bantuan aliran cytofluorimetry, ungkapan antigen permukaan CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 ditentukan. Immunodeficiencies dengan pelanggaran lekatan ditunjukkan oleh jangkitan kambuh, perlahan penyembuhan luka dan ketiadaan pus dalam penyakit jangkitan.

Penyiasatan sistem pelengkap

Kaedah pemeriksaan

Penentuan aktiviti hemolitik pelengkap - kajian laluan klasik pelarasan pengaktifan. Pelbagai serum serum pesakit dan orang yang sihat ditambah kepada eritrosit ram yang dipenuhi dengan antibodi. Satu unit aktiviti hemolytik diambil sebagai songsangan dari pencairan serum, di mana 50% daripada eritrosit dimusnahkan. Tahap hemolisis dinilai secara fotometrik oleh hasil hemoglobin dalam larutan. Pengurangan aktiviti hemolitik pelengkap diperhatikan dalam erythematosus lupus sistemik dengan penglibatan buah pinggang, glomerulonephritis akut. Gabungan immunodeficiencies, myasthenia gravis, hepatitis virus, limfoma, peningkatan - dengan penyakit kuning obstruktif, thyroiditis Hashimoto. Rheumatism, arthritis rheumatoid, periarteritis nodular. Dermatomyositis, infarksi miokardium, kolitis ulseratif, sindrom Reiter, gout.

Menentukan kaedah

• Penentuan komponen pelengkap. Penentuan kuantitatif dilakukan oleh kaedah immunodiffusion radial dan nephelometry.
  Kajian ini tidak bermaklumat, melainkan sifat antigenik komponen pelengkap diubah.
• Telah didapati bahawa komponen Clq-pelengkap meningkatkan fagositosis dan mengantara sitotoksis selular. Pengurangannya berlaku dalam penyakit-penyakit kompleks imun, lupus erythematosus sistemik, jangkitan purut dan tumor.
• Komponen C3 menyertai pengaktifan laluan pelengkap klasik dan alternatif. Pengurangan kepekatannya dikaitkan dengan jangkitan bakteria dan kulat kronik, kehadiran kompleks imun yang beredar atau tisu.
• Komponen C4 berpartisipasi dalam pengaktifan laluan klasik. Pengurangan kepekatannya dikaitkan dengan pengaktifan pelengkap yang berlanjutan dengan kompleks imun dan pengurangan konsentrasi penarik C1, yang mengawal pengaktifan jalur pelengkap klasik. Kekurangan C4 adalah sistemik lupus erythematosus, C4 peningkatan berlaku dengan penyakit buah pinggang, rasuah penolakan, keradangan akut, penyakit saluran gastrousus.
• C5a adalah serpihan kecil molekul C5, berpecah daripada itu sebagai hasil pengaktifan sistem pelengkap. Peningkatan kepekatannya berlaku dengan keradangan, sepsis, penyakit atopik dan alahan.
• Cl-inhibitor adalah faktor pelbagai fungsi. Ia mengawal pengaktifan komponen pelengkap C1, menghalang aktiviti kallikrein, plasmin dan faktor diaktifkan Hageman, protease Cls dan Or. Kekurangan C1-inhibitor membawa kepada angioedema.
• kajian pelengkap. Kepada serum standard yang tidak mempunyai sebarang komponen pelengkap, serum ujian ditambah dan aktiviti hemolitik pelengkap ditentukan. Sekiranya aktiviti hemolytic tidak dipulihkan kepada normal, ia dipercayai bahawa aktiviti komponen pelengkap dalam serum ujian dikurangkan.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]