Kajian imunologi dalam urologi

Menetapkan imunogram kepada pesakit urologi bermakna doktor yang hadir mengesyaki kehadiran gangguan dalam sistem imun. Jangkitan bakteria, virus, kulat yang berulang, manifestasi alahan, penyakit sistemik mungkin merupakan tanda-tanda gangguan ini, yang dicirikan oleh beberapa sindrom (berjangkit, onkologi, alahan, autoimun, limfoproliferatif). Seorang pesakit mungkin mempunyai beberapa sindrom. Sebagai contoh, penyakit berjangkit kronik (sindrom berjangkit) boleh menyebabkan kekurangan imun, dan kekurangan imun boleh menampakkan dirinya sebagai kecenderungan kepada penyakit berjangkit dan onkologi (sindrom onkologi). Kecenderungan kepada jangkitan mungkin berlaku terhadap latar belakang kekurangan imunosekunder, yang berkembang akibat penyakit limfoproliferatif, seperti leukemia. Terdapat tiga kumpulan utama perubahan patologi dalam sistem imun:

• kekurangan kuantitatif atau fungsi satu atau satu lagi pautan sistem imun, yang membawa kepada perkembangan keadaan kekurangan imun;
• gangguan dalam pengiktirafan antigen oleh sistem imun, yang membawa kepada perkembangan proses autoimun;
• tindak balas imun hiperreaktif atau "sesat", ditunjukkan oleh perkembangan penyakit alahan.

Terdapat kaedah saringan (ujian tahap 1) dan penjelasan (ujian tahap 2) immunodiagnostik. Yang pertama wujud untuk merekodkan gangguan dalam sistem imun, yang kedua - untuk menubuhkan mekanisme yang terlibat dalam pelaksanaannya untuk tujuan pembetulan imun selanjutnya.

Kekebalan sel B

Kaedah saringan

• Penentuan bilangan relatif dan mutlak B-limfosit menggunakan imunofluoresensi atau sitofluorometri aliran dengan antibodi monoklonal kepada antigen sel B (CD19, CD20, di mana CD ialah kelompok pembezaan). Kandungan normal B-limfosit pada orang dewasa ialah 8-19% daripada jumlah bilangan leukosit atau 190-380 sel/μl. Peningkatan kandungan B-limfosit berlaku dalam jangkitan bakteria dan kulat akut dan kronik, penyakit hati kronik, penyakit tisu penghubung sistemik, leukemia limfositik kronik, dan mieloma.
• Penentuan kepekatan imunoglobulin bukan spesifik (F, M, G, E) dengan imunodifusi jejarian ringkas, nephelometry atau turbometry, radioimmunoassay atau enzyme immunoassay (ELISA). Norma untuk orang dewasa: immunoglobulin (Ig) A 0.9-4.5 g / l. IgM 03-3.7 g / l. IgG 8.0-17 g / l. Peningkatan kepekatan imunoglobulin berlaku dalam keadaan patologi yang sama di mana peningkatan kandungan B-limfosit berlaku. Penurunan kepekatan imunoglobulin berlaku dalam hipogammaglobulinemia kongenital, neoplasma sistem imun, penyingkiran limpa, kehilangan protein, penyakit buah pinggang atau usus, rawatan dengan sitostatik dan imunosupresan.

Kaedah penjelasan

• Penentuan kompleks imun yang beredar dalam darah dengan pemendakan terpilih dalam polietilena glikol diikuti dengan ujian ketumpatan spektrofotometri (normal 80-20 U). Peningkatan dalam kompleks imun yang beredar adalah tipikal untuk jangkitan bakteria akut, kulat, virus, autoimun, penyakit kompleks imun, penyakit serum, tindak balas alahan jenis 3;
• Penentuan imunoglobulin khusus dalam darah berhubung dengan antigen bakteria dan virus, asid deoksiribonukleik (DNA) dalam penyakit autoimun, pengesanan antisperm (kemandulan autoimun) dan antibodi antirenal (pyelonephritis dan glomerulonephritis) dengan kaedah radial immunodiffusion atau ELISA.
• Penentuan antibodi antisperma dalam sperma [ujian MAR (tindak balas antiglobulin campuran)], normal - keputusan negatif.
• Penentuan kepekatan imunoglobulin dalam air kencing untuk tujuan diagnosis pembezaan antara pyelonephritis dan glomerulonephritis (selektiviti proteinuria).
• Penentuan kandungan IgE dalam jus prostat untuk tujuan mendiagnosis prostatitis alahan menggunakan kaedah immunodiffusion radial atau ELISA.
• Kajian tindak balas dalam tindak balas transformasi letupan B-limfosit kepada mitogen sel B (pokeweed mitogen untuk rangsangan tindak balas transformasi letupan B-limfosit dengan kehadiran T-limfosit), nilai normatifnya ialah 95-100%.

Pautan imuniti sel T

Kaedah saringan

• Penentuan bilangan relatif dan mutlak CD3 T-limfosit matang oleh tindak balas imunofluoresensi atau sitofluorometri aliran menggunakan antibodi anti-CD3 monoklonal. Norma untuk orang dewasa ialah 58-76% atau 1100-1700 sel / μl. Pengurangan dalam bilangan T-limfosit adalah penunjuk ketidakcukupan pautan imuniti selular. Ini adalah tipikal untuk beberapa kekurangan imun sekunder dan primer (jangkitan bakteria dan virus kronik: batuk kering, sindrom kekurangan imun yang diperolehi, tumor malignan, kegagalan buah pinggang kronik, kecederaan, tekanan, penuaan, kekurangan zat makanan, rawatan dengan sitostatik, pendedahan kepada sinaran mengion). Peningkatan bilangan T-limfosit berlaku terhadap latar belakang hiperaktif imun atau dalam penyakit limfoproliferatif. Dengan keradangan, bilangan T-limfosit mula-mula meningkat dan kemudian berkurangan. Ketiadaan penurunan dalam T-limfosit menunjukkan proses keradangan kronik.
• Penilaian subpopulasi limfosit.
  • Penentuan bilangan T-helper (antibodi anti-CD4). Biasanya 36-55% atau 400-1100 sel/mcl. Peningkatan bilangan sel ini berlaku dalam penyakit autoimun, penyakit Waldenstrom, pengaktifan imuniti antitransplantasi; pengurangan bilangan T-helper berlaku dalam jangkitan bakteria, virus, protozoa kronik, batuk kering, sindrom kekurangan imun yang diperolehi, tumor malignan, luka bakar, kecederaan, kekurangan zat makanan, penuaan, rawatan dengan sitostatik, pendedahan kepada sinaran mengion.
  • Penentuan bilangan penekan T (antibodi anti-CD4). Biasanya 17-37% atau 300-700 sel/μl. Peningkatan bilangan T-suppressors berlaku dalam keadaan yang sama di mana bilangan T-helper berkurangan, dan penurunan mereka berlaku dalam keadaan yang sama di mana kandungan T-helper meningkat.
  • Indeks imunoregulasi CD4/CD8, biasanya 1.5-2.5. Hiperaktif dengan nilai melebihi 2.5 (penyakit alahan dan autoimun); hypoactivity - kurang daripada 1.0 (kecenderungan kepada jangkitan kronik). Pada permulaan proses keradangan, indeks imunoregulasi meningkat, dan apabila ia reda, ia menjadi normal.

Kaedah penjelasan

• Penentuan bilangan pembunuh semulajadi (sel NK) - antibodi anti-CD16 dan anti-CD56. Norma untuk limfosit CD 16 ialah 6-26%, CD56 - 9-19%. Peningkatan bilangan sel NK berlaku semasa penolakan pemindahan, penurunan - dengan jangkitan virus, kanser, kekurangan imun primer dan sekunder, luka bakar, kecederaan dan tekanan, rawatan dengan sitostatik dan pendedahan kepada sinaran mengion.
• Penentuan bilangan T-limfosit dengan reseptor kepada interleukin-2 (penanda pengaktifan) - antibodi anti-CD25. Norma ialah 10-15%. Peningkatan bilangan mereka diperhatikan dalam penyakit alahan, penolakan pemindahan, tindak balas terhadap antigen yang bergantung kepada timus dalam tempoh akut jangkitan primer, penurunan - dalam penyakit yang sama di mana terdapat penurunan bilangan sel NK.
• Kajian ekspresi penanda pengaktifan - molekul histokompatibiliti kelas II HLA-DR. Peningkatan ekspresi berlaku dalam proses keradangan, pada pesakit dengan hepatitis C, penyakit seliak, sifilis, penyakit pernafasan akut.
• Penilaian apoptosis limfosit. Idea kasar tentang kesediaan limfosit untuk apoptosis boleh ditentukan oleh ekspresi reseptor Fas (CD95) pada permukaannya dan proto-onkogen bd-2 dalam mitokondria. Apoptosis limfosit dinilai dengan merawatnya dengan dua pewarna pendarfluor: propidium iodide, yang mengikat serpihan DNA, dan annexin Y, yang mengikat fosfatidilserin, yang muncul pada membran sel pada permulaan apoptosis. Hasilnya dinilai menggunakan cytofluorometer aliran. Keputusan dikira berdasarkan nisbah sel yang diwarnakan dengan pewarna yang berbeza. Sel yang tidak ternoda adalah berdaya maju, sel yang terikat hanya kepada annexin Y adalah manifestasi awal apoptosis, dengan propidium iodide dan annexin Y adalah manifestasi lewat apoptosis, pewarnaan dengan hanya propidium iodide menunjukkan nekrosis.
• Penilaian percambahan T-limfosit secara in vitro.
  • Perubahan dalam blastogenesis sel - tindak balas transformasi letupan limfosit. Leukosit diinkubasi dengan mana-mana mitogen asal tumbuhan (lektin). Phytohemagglutinin paling kerap digunakan selama 72 jam, kemudian smear diambil, diwarnakan dan bilangan letupan dikira! Indeks rangsangan ialah nisbah peratusan sel berubah dalam eksperimen (kultur dengan phytohemagglutinin) kepada peratusan sel berubah dalam kawalan (kultur tanpa phytohemagglutinin). Tindak balas transformasi letupan limfosit boleh dinilai dengan kemasukan label radioaktif (ZN-thymndinum) dalam sel kultur, kerana sintesis DNA meningkat semasa pembahagian sel. Gangguan dalam tindak balas proliferatif berlaku dalam kedua-dua kekurangan imun primer dan sekunder yang berkaitan dengan jangkitan, kanser, kegagalan buah pinggang, dan campur tangan pembedahan.
  • Dalam kajian ini, ekspresi penanda pengaktifan (CD25, reseptor transferin - CD71) dan molekul kompleks histokompatibiliti utama kelas II HLA-DR, yang secara praktikalnya tidak terdapat pada T-limfosit berehat, dinilai. T-limfosit dirangsang dengan phytohemagglutinin, selepas 3 hari ekspresi penanda pengaktifan dianalisis dengan kaedah tindak balas imunofluoresensi langsung atau tidak langsung, sitofluorometri aliran, menggunakan antibodi monoklonal kepada reseptor terpencil.
  • Pengukuran jumlah mediator yang disintesis oleh T-limfosit diaktifkan [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, γ-interferon, dll.] menggunakan radioimmunoassay atau ELISA. Yang paling penting ialah penilaian kepekatan γ-interferon dan IL-4 sebagai penanda Th1 dan Th2 dalam supernatan kultur yang diaktifkan dan di dalam sel. Jika boleh, adalah berguna untuk menentukan ekspresi gen untuk sitokin yang sepadan dengan tahap asid ribonukleik matriks dalam sel pengeluar dan keamatan ekspresi reseptor untuk sitokin yang sepadan.
    
• Reaksi perencatan penghijrahan limfosit. Limfosit T yang sensitif dalam tindak balas dengan antigen merembeskan limfokin, termasuk faktor yang menghalang penghijrahan limfosit. Fenomena perencatan diperhatikan apabila mitogens dimasukkan ke dalam kultur sel. Penilaian tahap perencatan membolehkan kita menilai keupayaan limfosit untuk merembeskan sitokin. Biasanya, kekerapan penghijrahan, bergantung kepada mitogen tertentu, adalah 20-80%.
• Penilaian sitotoksisiti sel NK. Keupayaan sel pembunuh semulajadi untuk membunuh sel sasaran garisan erythromyeloid K-562 ditentukan. Jika sitotoksisiti bergantung kepada antibodi dinilai, sel sasaran yang disalut dengan antibodi IgG digunakan. Sel sasaran dilabelkan dengan 3H-uridine dan diinkubasi dengan sel efektor. Kematian sel sasaran dinilai dengan pelepasan label radioaktif ke dalam larutan. Penurunan sitotoksisiti berlaku dalam neoplasma malignan. Dalam sesetengah kes, apabila perlu untuk meramalkan keberkesanan rawatan dengan interleukin, sitotoksisiti sel NK dinilai semasa pengeraman dengan sitokin tertentu.

Kajian fungsi fagosit

Kaedah saringan

Kajian keamatan penyerapan sel mikrob oleh fagosit (fagositosis zarah lateks, kultur ujian staphylococcus, E. coli atau mikroorganisma yang diasingkan daripada pesakit). Dengan mengempar darah heparinized, penggantungan leukosit diasingkan, serum kumpulan darah IV ditambah untuk opsonisasi (opsonin ialah protein yang meningkatkan fagositosis). Suspensi mikrob dicairkan, dicampur dengan leukosit dan diinkubasi selama 120 minit, mengambil sampel untuk analisis 30.90.120 minit selepas permulaan inkubasi. Calitan dibuat daripada penggantungan leukosit yang dikumpul. Penunjuk fagositosis berikut ditentukan:

• indeks fagositik - peratusan sel yang memasuki fagositosis dalam masa 30 minit dan 120 minit pengeraman; nilai piawai indeks fagosit (30) ialah 94%, indeks fagosit (120) ialah 92%;
• nombor fagositik - bilangan purata bakteria yang terletak secara intraselular; nilai standard nombor fagosit (30) ialah 11%, nombor fagosit (120) ialah 9.8%;
• pekali nombor fagosit - nisbah nombor fagosit (30) kepada nombor fagosit (120); biasanya 1.16;
• Indeks bakteria neutrofil - nisbah bilangan mikrob yang terbunuh di dalam fagosit kepada jumlah mikrob yang diserap; biasanya 66%.

Kaedah penjelasan

• Kajian keupayaan bakteria fagosit dalam ujian dengan nitroblue tetrazolium (NBT) - ujian NBT. Pewarna tetrazolium nitroblue kuning ditambah kepada leukosit. Apabila neutrofil menyerap pewarna, proses pengurangan berlaku di bawah pengaruh radikal oksigen bebas, mengakibatkan pewarnaan biru. Tindak balas dijalankan dalam plat dasar rata 96-telaga. Larutan Hanks (NBT spontan) ditambah kepada tiga telaga pertama dengan campuran NBT dan leukosit, dan zarah lateks ditambah kepada yang kedua; adunan diinkubasi pada suhu 37 C selama 25 min. Hasilnya dibaca pada 540 nm pada pembaca dan dinyatakan dalam unit sewenang-wenangnya. Pekali rangsangan (K _st ) dikira, sama dengan nisbah ketumpatan optik dalam telaga yang dirangsang kepada purata ketumpatan optik dalam telaga tanpa rangsangan. Dalam orang yang sihat, NBT _spont = 90 ± 45 CU, NBT _stim = 140 ± 60 CU. K _st = 1.78±0.36.
• Kajian molekul lekatan. Sitofluorometri aliran digunakan untuk menentukan ekspresi antigen permukaan CD11a/CD18, CD11b/CD18, CD11c/CD18. Kekurangan imun dengan lekatan terjejas ditunjukkan oleh jangkitan berulang, penyembuhan luka yang perlahan, dan ketiadaan nanah dalam fokus jangkitan.

Kajian sistem pelengkap

Kaedah saringan

Penentuan aktiviti hemolitik pelengkap adalah kajian tentang laluan klasik pengaktifan pelengkap. Pencairan serum yang berbeza daripada orang yang sakit dan sihat ditambah kepada eritrosit ram yang disalut dengan antibodi. Unit aktiviti hemolitik adalah timbal balik pencairan serum di mana 50% eritrosit dimusnahkan. Tahap hemolisis dianggarkan secara fotometrik dengan pembebasan hemoglobin ke dalam larutan. Pengurangan aktiviti hemolitik pelengkap diperhatikan dalam lupus erythematosus sistemik dengan kerosakan buah pinggang, glomerulonephritis akut, kekurangan imunodefisiensi gabungan, myasthenia, hepatitis virus, limfoma, peningkatan - dalam jaundis obstruktif, tiroiditis Hashimoto, rematik, rheumatoid arthritis, periarteritis nodular. dermatomyositis, infarksi miokardium, kolitis ulseratif, sindrom Reiter, gout.

Kaedah penjelasan

• Penentuan komponen pelengkap. Penentuan kuantitatif dilakukan oleh immunodiffusion radial dan nephelometry.
  Kajian ini tidak bermaklumat melainkan sifat antigenik komponen pelengkap diubah.
• Telah ditubuhkan bahawa komponen Clq pelengkap meningkatkan fagositosis dan mengantara sitotoksisiti selular. Penurunannya berlaku dalam penyakit kompleks imun, lupus erythematosus sistemik, jangkitan purulen dan tumor.
• Komponen C3 terlibat dalam pengaktifan laluan pelengkap klasik dan alternatif. Penurunan kepekatannya dikaitkan dengan jangkitan bakteria dan kulat kronik, kehadiran kompleks imun yang beredar atau tisu.
• Komponen C4 terlibat dalam pengaktifan laluan klasik. Penurunan kepekatannya dikaitkan dengan pengaktifan pelengkap yang berpanjangan oleh kompleks imun dan penurunan kepekatan perencat C1, yang mengawal pengaktifan laluan pelengkap klasik. Kekurangan C4 berlaku dalam lupus erythematosus sistemik, peningkatan C4 berlaku dalam penyakit buah pinggang, penolakan pemindahan, keradangan akut, dan penyakit gastrousus.
• C5a ialah serpihan kecil molekul C5, yang terpecah daripadanya akibat pengaktifan sistem pelengkap. Kepekatannya meningkat semasa keradangan, sepsis, penyakit atopik dan alahan.
• Cl-inhibitor adalah faktor pelbagai fungsi. Ia mengawal pengaktifan komponen pelengkap C1, menghalang aktiviti kallikrein, plasmin dan faktor Hageman, Cls dan Or protease yang diaktifkan. Kekurangan C1-inhibitor membawa kepada angioedema.
• kajian fungsional pelengkap. Serum ujian ditambah kepada serum standard yang tidak mempunyai sebarang komponen pelengkap dan aktiviti hemolitik pelengkap ditentukan. Sekiranya aktiviti hemolitik tidak dipulihkan kepada normal, aktiviti komponen pelengkap ini dalam serum ujian dianggap berkurangan.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ]