Mikroskopi seumur hidup confocal kornea

Mikroskopi konfokal kornea adalah salah satu kaedah penyelidikan moden; ia membolehkan pemantauan intravital kornea dengan visualisasi tisu pada tahap selular dan mikrostruktur.

Kaedah ini, disebabkan oleh reka bentuk asal mikroskop dan kuasa penyelesaiannya yang tinggi, membolehkan visualisasi tisu kornea hidup, pengukuran ketebalan setiap lapisannya, dan penilaian tahap gangguan morfologi.

Tujuan mikroskop confocal kornea

Untuk mencirikan perubahan morfologi kornea yang berlaku dalam pelbagai penyakit radang dan distrofik, serta akibat daripada campur tangan pembedahan dan pendedahan kepada CL.

Data pemeriksaan morfologi adalah perlu untuk menilai keterukan proses patologi, keberkesanan rawatan dan untuk menentukan taktik pengurusan pesakit.

Petunjuk untuk prosedur

• Penyakit radang kornea ( keratitis ).
• Penyakit distrofik kornea ( keratoconus, distrofi Fuchs, dll.).
• Sindrom mata kering.
• Keadaan selepas campur tangan pembedahan pada kornea ( pemindahan kornea menembusi, pembedahan keratorefraktif).
• Keadaan yang berkaitan dengan pemakaian kanta sentuh.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Persediaan

Pemeriksaan ini boleh dilakukan tanpa menggunakan anestetik. Setitik cecair rendaman diletakkan pada kanta objektif mikroskop confocal. Ini menghapuskan sentuhan langsung kanta dengan kornea dan meminimumkan risiko kerosakan pada epitelium.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Teknik mikroskop confocal kornea.

Kajian dilakukan menggunakan mikroskop confocal ConfoScan 4 (Nider) dengan pembesaran 500 kali. Peranti ini membolehkan kornea diperiksa sepanjang keseluruhan ketebalannya.

Saiz kawasan yang diperiksa ialah 440 × 330 μm, ketebalan lapisan pengimbasan ialah 5 μm. Kanta dengan titisan gel dibawa ke kornea sehingga ia menyentuh dan dipasang supaya ketebalan lapisan cecair rendaman ialah 2 mm. Reka bentuk peranti membolehkan pemeriksaan kornea di zon tengah dan kawasan paracentralnya.

Kontraindikasi kepada prosedur

Kontraindikasi relatif adalah kerengsaan mata yang teruk akibat proses keradangan akut.

[ 10 ], [ 11 ]

Prestasi biasa

Gambar morfologi normal kornea

Epitelium anterior terdiri daripada 5-6 lapisan sel. Ketebalan purata keseluruhan epitelium adalah lebih kurang 50 µm. Mengikut struktur morfologi, lapisan berikut dibezakan (dari dalam ke luar): basal, sel berbentuk awl dan dangkal.

• Lapisan paling dalam (basal) diwakili oleh sel silinder yang kecil, padat, tanpa nukleus yang kelihatan. Sempadan sel basal jelas dan terang.
• Lapisan tengah terdiri daripada 2-3 lapisan sel berduri (bersayap) dengan invaginasi dalam yang mana tumbuh-tumbuhan sel jiran tertanam. Secara mikroskopik, sempadan sel boleh dibezakan dengan jelas, dan nukleus mungkin tidak ditakrifkan atau mungkin tidak jelas.
• Lapisan cetek epitelium diwakili oleh satu atau dua lapisan sel poligon dengan sempadan yang jelas dan ketumpatan homogen. Nukleus biasanya lebih cerah daripada sitoplasma, di mana cincin gelap perinuklear juga boleh dibezakan.

Di antara sel-sel lapisan cetek, sel gelap dan terang dibezakan. Peningkatan pemantulan sel epitelium menunjukkan penurunan dalam kadar metabolisme dan penyahkuamatan permulaannya.

Membran Bowman ialah struktur lutsinar yang tidak memantulkan cahaya, jadi lazimnya mustahil untuk memvisualisasikannya dengan mikroskop confocal.

Pleksus saraf subbasal terletak di bawah membran Bowman. Biasanya, gentian saraf muncul sebagai jalur terang yang berjalan selari pada latar belakang gelap, bersentuhan antara satu sama lain. Pemantulan (reflektif) mungkin tidak sekata di sepanjang gentian.

Stroma kornea menduduki 80 hingga 90% daripada ketebalan kornea dan terdiri daripada komponen selular dan ekstraselular. Unsur selular utama stroma ialah keratosit; mereka membentuk kira-kira 5% daripada volum.

Gambar mikroskopik tipikal stroma termasuk beberapa badan berbentuk bujur tidak teratur terang (nukleus keratosit) yang terletak dalam ketebalan matriks kelabu gelap atau hitam yang lutsinar. Biasanya, visualisasi struktur ekstrasel adalah mustahil kerana ketelusannya. Stroma boleh dibahagikan secara bersyarat kepada sublapisan: anterior (terletak terus di bawah membran Bowman dan membentuk 10% daripada ketebalan stroma), anterior-tengah, tengah dan posterior.

Ketumpatan purata keratosit lebih tinggi di stroma anterior, secara beransur-ansur berkurangan ke arah lapisan posterior. Ketumpatan sel stromal anterior hampir dua kali lebih tinggi daripada sel stromal posterior (jika ketumpatan sel stromal anterior diambil sebagai 100%, maka ketumpatan sel stromal posterior adalah kira-kira 53.7%). Dalam stroma anterior, nukleus keratosit mempunyai bentuk bulat berbentuk kacang, manakala di stroma posterior ia berbentuk bujur dan lebih memanjang.

Nukleus keratosit mungkin berbeza dalam kecerahan. Keupayaan berbeza untuk memantulkan cahaya bergantung pada keadaan metabolik mereka. Sel yang lebih cerah dianggap sebagai keratosit yang diaktifkan (sel "tekanan"), yang aktivitinya bertujuan untuk mengekalkan homeostasis dalaman kornea. Dalam bidang norma dan visual, sel diaktifkan tunggal ditemui.

Gentian saraf dalam stroma kornea anterior divisualisasikan sebagai jalur homogen terang, selalunya membentuk bifurkasi.

Membran Descemet biasanya telus dan tidak dapat dilihat dengan mikroskop confocal.

Epitelium posterior ialah satu lapisan sel rata heksagon atau poligon dengan permukaan cahaya seragam dengan latar belakang sempadan antara sel gelap yang jelas.

Peranti ini mempunyai keupayaan untuk mengira ketumpatan sel secara manual atau automatik, kawasannya dan pekali kebolehubahan.

Perubahan patologi dalam struktur kornea

Keratoconus dicirikan oleh perubahan ketara dalam epitelium anterior dan stroma kornea.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]